测序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒可提供高效、5 分钟的一步克隆策略,用于将校正性聚合酶–扩增平末端 PCR 产物直接插入质粒载体中以进行测序。每个试剂盒均使用含经过特殊设计的测序引物位点(可从各反应中获得更多的插入序列和更少的载体序列)的 pCR™4Blunt-TOPO™ 载体(参见图)。这些试剂盒包括克隆和选择包含您 PCR 片段的重组载体所需的所有物品。
pCR™4Blunt-TOPO™ 载体—针对测序进行优化
我们从 pCR™4Blunt-TOPO™ 载体中删除了大量的多克隆位点,以将测序引物位点与插入位点之间的距离缩短至 33 bp。这意味着测序反应具有更少的载体序列和更多的插入序列。pCR™4Blunt TOPO™ 载体具有 4 种常见测序引物的位点:M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。该试剂盒包括各等份试液。
pCR™4Blunt-TOPO™ 克隆选择和操作
pCR™4Blunt-TOPO™ 载体包含氨苄和抗性标记物以及用于阳性选择的 LacZα-ccdB 基因融合。载体的尽可能减少的化多克隆位点仍包括用于克隆 PCR 产物简化切除的旁侧 EcoRI 位点和用于在测序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位点。’T7 和 T3 启动子也用于体外转录。
简化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO 克隆技术,无需使用含有特异性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、载体制备或其他耗时长的 DNA 操作步骤。™只需将 PCR 反应物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中,孵育 5 分钟,并使用提供的大肠杆菌感受态细胞进行转化。
高效克隆
携带所需插入片段的克隆高达 95%,您可以筛选更少的克隆体,节省时间和成本。该试剂盒中使用的 pCR™4Blunt-TOPO™ 载体无突出端,用于高效连接由校正性耐热聚合酶(可留下平末端 PCR 产物)产生的 PCR 产物。
克隆标准
在克隆方面,TOPO™ 克隆技术已作为一种可靠技术供成千上万的科学家使用达十余年。快速、简单易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多种应用中应用于多种不同载体。
测序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒—试剂盒规格
根据您的需求,测序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒可与可提供不同优势的多种感受态细胞一起购买:
• 一般克隆:0 细胞(货号K2875-J10、K2875-20、K2875-40)
• 高效克隆:0 Electrocomp™ 细胞(货号号 K2880-20、K2880-40)
• 一般克隆,噬菌体 T1 抗性:DH5α-T1R(货K2895-20)
• 快速生长:Mach1™-T1R 化学感受态大肠杆菌(货号 K2835-20)
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.