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　　知识问答：ELISA常见问题解答

1、试剂盒从冰箱拿出后未充分平衡室温，会有什么影响?

如果试剂盒从冰箱中拿出后未充分平衡至室温(20～25℃)，可能会导致温育时间不够，从而使OD值偏低。

2.、移液器吸液量不足或吸头内壁不清洁，会造成什么后果?

移液器吸液量不足或吸头内壁不清洁，都可能导致加样量不足，造成OD值偏低。此外，吸头内壁不清洁还可能导致非特异性吸附，进一步影响实验结果。

3、操作顺序颠倒或遗漏步骤，会有什么后果?

如果操作顺序颠倒或遗漏步骤，很可能导致实验失败，例如漏加酶结合物、显色剂等，使整块ELISA板都不显色。

4、温育时间不够或温育温度未达到要求，会有什么影响?

温育时间不够或温育温度未达到要求，都会影响反应的进行，导致OD值偏低。例如，保温用的湿盒没有预温，或培养箱温度不符合操作要求等。

5、洗板液在配置过程中出现问题，会造成什么后果?

洗板液在配置过程中出现问题，如量筒不干净、含有酶抑制物、浓度过高等，都可能导致洗去特异性结合物，使OD值偏低。

6、洗板时冲击力太大、浸泡时间过长、洗板次数过多，会有什么影响?

这些操作都可能导致洗去结合在包被板的特异性结合物，从而使OD值偏低。

7、加完终止液后没有轻轻充分混匀ELISA板液就立即读数或放置太久才进行读数，会有什么影响?

这可能导致检测OD值偏低或偏高。一般建议在加完终止液后3分钟之内进行读数。

8、酶标仪检测波长设定有误，会有什么后果?

如果酶标仪检测波长设定有误，例如选用的波长不是产物的敏感吸收峰，可能会导致OD值偏低或偏高。

9、阴性对照出现阳性结果，可能的原因是什么?

阴性对照出现阳性结果可能是由于样品、试剂被污染，或加样时操作不当导致相邻孔之间溶液溅洒出现交叉污染。此外，抗体量过多导致非特异性结合也可能是一个原因。

10、酶标板整体背景高，可能的原因是什么?

酶标板整体背景高可能是由于底物孵育过程没有避光，导致背景信号增强。

11、复孔之间重复性差，可能的原因是什么?

复孔之间重复性差可能是由于加样本及试剂量不准、孔间不一致等原因造成的。此外，操作条件、人员等的不一致也可能导致重复性差。

12、阳性对照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么?

阳性对照值偏低或低吸光度可能是由于温育的时间或温度不够、显色反应时间太短、显色液变质或试剂过期、试剂稀释有误等原因造成的。

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