测序用 TOPO® TA Cloning®试剂盒可提供高效、5 分钟的一步克隆策略（“TOPO® 克隆”），用于将 Taq 聚合酶–扩增 PCR 产物直接插入至质粒载体以进行测序。各试剂盒均使用具有经过特殊设计的测序引物位点（可从各反应中获得更多的插入序列和更少的载体序列）的 pCR™4-TOPO® TA 载体，并可根据您的需要和预算，提供多种感受态细胞或无感受态细胞。这些试剂盒具有克隆和选择包含您 PCR 片段的重组载体所需的所有物品。测序用 TOPO® TA 克隆®试剂盒的特点：

• 获得更多序列—使用标准测序引物时，可获得更多插入序列和更少载体序列
• 快速且简便—从 PCR 至克隆仅需 3 步，手动操作时间减至 5 分钟
• 高效—通过正确插入可获得高达 95% 的克隆
• 成熟—在过去十年中性能可靠，引用次数超过 4,000 次

测序用 TOPO® TA Cloning®试剂盒—概述

载体：pCR™4-TOPO® TA 载体—克隆载体经过优化，可改善测序结果

克隆方法：TOPO® TA Cloning ®—基于–拓扑异构酶 I 的含 3´A 突出端（Taq 扩增）的 PCR 产物与载体的 5 分钟连接

感受态细胞：多种选择—从包含常规、高效、噬菌体 T1-耐受性或快速生长型感受态细胞的试剂盒中选择或使用您自有的细胞

pCR™4-TOPO® TA 载体—针对测序进行优化
我们从 pCR™4-TOPO® TA 载体中删除了大量的多克隆位点，以将测序引物位点与插入位点之间的距离缩短至 33 bp。这意味着测序反应具有更少的载体序列和更多的插入序列。pCR™4-TOPO® TA 载体具有适用于 4 种常见测序引物的位点：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。该试剂盒包括各等份试液。

pCR™4-TOPO® TA 克隆选择和操作
pCR™4-TOPO® TA 载体包含氨苄和抗性标志物以及用于阳性选择和蓝/白斑筛选的 LacZα-ccdB 基因融合。载体的尽可能减少的化多克隆位点仍包括用于克隆 PCR 产物简化切除的旁侧 EcoRI 位点和用于在测序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位点。’T7 和 T3 启动子也用于体外转录。

简化的基于 TOPO® 的克隆
使用 TOPO® 克隆技术，无需使用含特异性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、载体制备或其他耗时长的 DNA 操作步骤。只需将 PCR 反应物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中，孵育 5 分钟，并使用提供的大肠杆菌感受态细胞进行转化。

高效克隆
携带所需插入片段的克隆高达 95%，您可以筛选更少的克隆体，节省时间和成本。该试剂盒中使用的 pCR™4-TOPO® TA 载体含有 3´T 突出端，用于高效连接含 3´A 突出端的 Taq 扩增 PCR 产物。

克隆标准
在克隆方面，TOPO® 克隆技术已作为一种可靠技术供成千上万的科学家使用达十余年。快速、简单易用且高效的 TOPO® 克隆已在多种应用中应用于多种不同载体。

测序用 TOPO® TA Cloning® 试剂盒—试剂盒选项
根据您的需求，测序用 TOPO® TA Cloning® 试剂盒可与提供不同优势的多种感受态细胞一起购买：

• 一般克隆：0（货号 K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
• 高效克隆：0 Electrocomp™ 细胞（货号K4580-01、K4580-40）
• 一般克隆，噬菌体 T1 抗性：DH5α-T1R（货号 K4595-01、K4595-40）
• 快速生长：Mach1™-T1R 化学感受态大肠杆菌（货号 K4530-20）
• 自行提供：灵活性高且可节省成本（货号 450030）

我们还提供另一个版本的试剂盒，包括 PureLink™ 快速质粒小提试剂盒（货号 K4575-02）用于分离清洁、已完成测序的重组质粒。

相关链接

• 定制载体构建和克隆服务
• 质粒 DNA 纯化试剂盒选择指南
• PCR 试剂、仪器和耗材