《药品GMP指南》生物指示剂的应用中指出,实验室在接收商品化生物指示剂时,应进行微生物数量测定。
那么压力蒸汽灭菌生物指示剂的总芽孢数是如何确定的呢?接下来为大家分享泰林压力蒸汽灭菌生物指示剂的芽孢计数方法(121℃灭菌生物指示剂均选用嗜热脂肪地芽孢杆菌 Geobacillus stearothermoρhilus ATCC7953)。
随机抽取需检验批次生物指示剂4片(支)与相关物品一并放入生物安全柜中,用酒精棉对指示剂初级包装进行擦拭,通风15min以上,后续操作如下:
注意:物料准备过程中,切勿使用紫外照射生物指示剂,可能会导致计数结果偏低。
将生物指示剂转移至生物安全柜内,取出载体,加入到含3~4颗4mm~6mm玻璃珠和3mL无菌水的试管中,置于涡旋混匀仪上充分振荡,将试管中载体打散成纤维状后,再加入7mL无菌水,制成均一的菌悬液,该试管记为10-1(同步平行4片)。
将悬液式生物指示剂(直管式,规格:0.3mL/支),用直管切割器打开置于含9.7mL无菌水的试管中,置于涡旋振荡仪上混匀,该试管记为10-1。
将上述10-1试管放置于95℃~100℃恒温水浴锅中热激活15min,热激活结束后立即放入 0℃~4℃冰水混合浴中迅速冷却至室温。
注:根据生物指示剂总芽孢数适当调整稀释级,建议最终稀释芽孢数在30~300cfu/mL。
总芽孢数cfu/片(支)=平均菌落数×稀释倍数
嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermoρhilus)ATCC7953菌落形态呈米黄色、表面光滑、不透明圆形,菌落生长状态良好,单一,无杂菌。总芽孢数结果应在产品标定值的50%~300%范围内。
★切勿将生物指示剂进行紫外照射消毒,建议对初级包装进行擦拭。
★应按2020年版《中国药典》要求,选择无菌水作为稀释液。
★吸取含纸质载体的菌液时,避免纤维堵枪头,导致移液不准确。
★建议以单片(支)生物指示剂的形式进行计数,确保每片(支)生物指示剂计数结果均符合要求。
★建议使用玻璃珠(4mm~6mm)对纸质载体进行打散处理。
★芽孢计数过程中必须进行热激活处理:温度95℃~100℃,时间15min