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武汉市所在地
| 一、细胞基本属性 | |
| 细胞货号 | SNL-069 |
| 细胞种属 | 人 |
| 生长情况 | 贴壁 |
| 培养条件 | McCoy’s 5a+10%FBS+1%双抗 |
| 培养环境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| 二、细胞培养操作 | |
| 换液周期 | 2-3天 |
| 培养基体积 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 传代比例 | 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） |
| 传代方法 | 1.尽量吸干净T25瓶原培养基； 2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS； 3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化； 5.消化到细胞间隙变大，但未*脱落时加2-3ml*培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清； 7.加新的*培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 8.补足*培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； |
| 注意事项 | 不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间 消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。 |
| 三、细胞冻存操作 | |
| 冻存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手tui荐)或92%*培养基+8%DMSO(高手tui荐); |
| 冻存规格 | 200-300万/ml，1ml每管 |
| 冻存方法 | 1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
Tips：
细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条；
我们tui荐使用尚恩生物HT-29（人结肠癌细胞）zuan用*培养基（产品货号：SNLM-069）作为体外培养HT-29（人结肠癌细胞）的培养基。
