原果胶含量试剂盒说明书-制药网-手机版

For Research Use only

仅供研究用

货号：QYS-23098

微量法 100管/48样

　　注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

　　原果胶含量测定意义

　　果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用，在食品、纺织、印染、烟草、

　　冶金等领域具有较广泛的应用。

　　原果胶含量测定原理

　　原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在 530 nm 处有特征吸收峰。

　　原果胶含量试剂盒需自备的仪器和用品

　　天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸和蒸馏水。

　　试剂的组成和配制

　　提取液一：液体 100mL×2 瓶，4℃保存。

　　提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。

　　试剂一：浓硫酸，自备。

　　试剂二：液体 2mL×1 支，4℃保存。

　　试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。

　　原果胶含量样品处理

　　将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为 1: 20 的比列(建议取约 0.05g 样

　　品，加入 1mL 提取液一)，置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，取出冷却后于 5000g、 25℃ 离心 10min，去掉上清，沉淀中再加入 1mL 提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入 1mL 提取液二，置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h，取出冷却后于 8000g、25℃离心15min，取上清液待测。

　　原果胶含量测定操作表

　　详见说明书

　　充分混匀，取 200μL 置于微量石英比色皿/96 孔板中，测定 530nm 处吸光值，分别记为 A1、A2、A3 和 A4。△A1=A2-A1，△A2=A4-A3

　　注意：空白管和标准管只需测定一次。计算公式

　　a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

　　原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C 标准×V 标) ×△A2÷△A1÷(W×V 样÷V 样总) = 0.25×△A2÷△ A1÷W

　　C 标准：标准品浓度，0.25mg/mL；V 标：反应体系中加入标准品体积，0.02mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，

　　1mL；W：样本鲜重，g。

　　b.用 96 孔板测定的计算公式如下

　　原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C 标准×V 标) ×△A2÷△A1÷(W×V 样÷V 样总) =0.25×△A2÷△ A1÷W

　　C 标准：标准品浓度，0.25mg/mL；V 标：反应体系中加入标准品体积，0.02mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，

　　1mL； W：样本鲜重，g。