植物花青素合成酶(ANS)ELISA试剂盒实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定样品指标水平。样品包括血清血浆尿液脑脊液细胞固体组织等，用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入样品，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中浓度，或者与CUTOFF值相比较，从而判定标本阴阳性。

　　BS-8058  植物花青素合成酶(ANS)ELISA检测试剂盒  96T/48T

　　ELISA试剂盒组成

　　1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶

　　2 酶标试剂 6ml×1瓶

　　3 酶标包被板 12孔×8条

　　4 样品稀释液 6ml×1瓶

　　5 显色剂A液 6ml×1瓶

　　6 显色剂B液 6ml×1/瓶

　　7 终止液 6ml×1瓶

　　8 标准品 0.5ml×1瓶

　　9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶

　　10 封板膜 2张

　　样品收集、处理及保存方法

　　1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转 离心10分钟将血清和红细胞迅速 小心地分离。

　　2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

　　3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

　　5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在 室温下解冻并确保样品均匀地充 分解冻。

　　样本要求

　　1.样本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　植物花青素合成酶(ANS)ELISA试剂盒操作步骤

　　1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照随货说明书中图表在小试管中进行稀释。

　　2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　计算

　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　植物花青素合成酶(ANS)ELISA试剂盒注意事项

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　10.保存2-8℃。

　　11.有效期：6个月