小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒

　　小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中 C-反应蛋白(CRP)的含量。

　　一、产品说明

　　规格：96T、48T

　　试剂盒性能：

　　1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。

　　2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于 10%和 10% 。

　　检测范围：

　　7.5 ng/mL - 240 ng/mL

　　灵敏度：

　　最小低检测浓度小于 1.0 ng/mL

　　保存条件及有效期：

　　1.试剂盒保存： 2-8℃。

　　2.有效期： 6 个月

　　二、实验原理：

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠 C-反应蛋白(CRP)水平。用纯化的小鼠 C-反应蛋白(CRP)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠 C-反应蛋白(CRP)，再与 HRP 标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经 过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠 C-反应蛋白(CRP)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中小鼠 C-反应蛋白(CRP)含量。

　　三、小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA检测试剂盒组成：

　　注：标准品浓度依次为：240、120、60、30、15、0 ng/mL.

　　四、样本处理及要求：

　　1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收 集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

　　2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心。

　　3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过 程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

　　4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液， 细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离 心。

　　5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

　　6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

　　7. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　五、操作步骤

　　1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 加酶：每孔加入酶标试剂 100μl，空白孔除外。

　　4. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。

　　5. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。

　　6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

　　7. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟.

　　8. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　9. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

　　六、注意事项：

　　1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6. 底物请避光保存。

　　7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9. 本试剂不同批号组分不得混用。

　　10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

　　注：本产品仅用于科研实验，凡购买本公司ELISA试剂盒的客户，均可享受免费的ELISA代测服务。详情可询我司在线客服和经理!

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