UDP葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA检测试剂盒技术资料

　　检测原理：

　　UDP葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法。向预包被了抗体的微孔板中，加入标准品和待测样本，温育后，加入生物素标记抗体和过氧化物酶标记的链霉亲和素。经过温育和洗涤结合形成的免疫复合物，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子浓度呈正相关。最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度(OD)值，通过绘制标准曲线计算出样本待测因子的浓度。

　　适用样本：

　　血清、血浆、细胞培养上清液和组织等。

　　实验方法：

　　双抗夹心法。

　　产品别名：

　　UGCG;GCS;GLCT1;UDP-glucose ceramide glucosyltransferase;ceramide glucosyltransferase;UDP-glucose:N-acylsphingosine D-glucosyltransferase;glucosylceramide synthase;glycosylceramide synthase;UDP葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)

　　试剂盒组分

　　ELISA酶标板、标准品、生物素化抗体、浓缩HRP酶结合物、酶结合物稀释液、生物素化抗体稀释液、标准品&样品稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液(TMB)、反应终止液、封板覆膜

　　需自备物品

　　1.酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ;

　　2.洗板机(可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出);

　　3.高精度单道加液器;

　　4.高精度多道加液器;

　　5.37℃恒温箱;

　　6.低温离心机;

　　7.纯净水或蒸馏水。

　　操作步骤

　　1.从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于2-8℃;

　　2.分别将标本或不同浓度的标准品加入相应孔中(100μl/孔)， 37℃孵箱孵育90分钟;

　　3.弃掉板内液体，洗板2次;

　　4.加入生物素化抗体工作液(100μl/孔)，37℃孵箱孵育60分钟;弃掉板内液体，洗板3次;

　　5.除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱，避光孵育30分钟;弃掉板内液体，洗板5次

　　6.加入TMB显色工作液(包括空白孔)100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，当标准曲线高浓度的颜色较深，有明显的颜色梯度的时候，即可终止。试验显色反应请勿超过30分钟;

　　7.加入终止液(包括空白孔)100μl/孔，混匀后即刻测量OD(450nm)值(10分钟内)。

　　8.计算标本待测因子含量。

　　注意事项

　　1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。

　　2.浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。

　　3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，使结晶溶解后再配制洗涤液。

　　4.实验过程中，冻干标准品为一次性使用，不得分装。因其浓度较低，溶解两小时候后，会迅速失活。

　　5.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

　　6.配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。

　　7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。

　　8.酶免实验中标准品和样本检测时建议作复孔。

　　9.将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2-8℃保存。

　　10.显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

　　11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中。

　　12.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，波长应该设置为450nm和630nm.

　　13.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。

　　14.各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　15.每次试验测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数。

　　16.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　17.以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时， 用带纸屑的吸水材料应慎重， 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。

　　18.用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值。

　　19.进行复孔实验时，结果计算一定要求平均值。

　　20.标本溶血可能会有假阳性结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

　　21.试验时，应该将加过样品的板条放于密闭盒内，并保持湿度约60%左右;

　　22.为保证恒温箱内的温度为37℃，恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定。

　　精密度

　　批间差:CV%<10%;批内差:CV%<8%

　　储存

　　-20℃,短期4℃

　　有效期

　　12个月

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