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dNTP用途
高质量的脱氧核糖核苷酸 (dNTP) 对 PCR 、 RT-PCR 、测序和标记等反应的成功都非常重要; PCR反应中 dUTP 替代 dTTP ,导致产物中含有尿嘧啶,这种掺入适用于很多应用,将尿嘧啶- N -糖基化酶 UNG酶(有时称为UDG) 加入到 PCR 反应中,可切割任何污染PCR产物中的尿嘧啶,从而避免错误的形成,这在临床 PCR 诊断试剂中应用非常广泛。如果四种脱氧核糖核苷酸的浓度不*,将大大增加聚合酶的错配机率;如果纯度不高,或者混有甲基化的脱氧核糖核苷酸将造成产物的甲基化;或者含有脱氧核糖核苷一磷酸、脱氧核糖核苷二磷酸也会降低聚合酶的聚合能力。
dNTP特征
• 特异性吸光值:
Nucleotide | 250/260 | 280/260 |
dATP | 0.80 ± 0.03 | 0.15 ± 0.03 |
dCTP | 0.80 ± 0.03 | 0.96 ± 0.03 |
dGTP | 1.15 ± 0.03 | 0.67 ± 0.03 |
dTTP | 0.60 ± 0.03 | 0.70 ± 0.03 |
dUTP | 0.73 ± 0.03 | 0.38 ± 0.03 |
• zui大吸收波长
| l max. |
dATP | 256nm |
dCTP | 252nm |
dGTP | 271nm |
dTTP | 267nm |
dUTP | 262nm |
• HPLC 分析, 脱氧核糖核苷三磷酸的纯度> 98%