PCR 条件

反应体系

时间

无需摸索条件

50ul

1-2 天

需要摸索条件

50ul

3-4 天

差减杂交PCR

差减杂交(Subtractive hybridization)的原理非常简单，首先将RNA反转录为双链cDNA，称为tester(含有目的基因)；对照RNA(不含目的基因)同样处理，产生cDNA为driver，微量的tester和过量的driver在合适的条件下杂交，tester中和driver中相同的基因杂交子就被除去，在tester中*的基因被富集，通过PCR方法扩增出来，得到差减庫，扩增产物可以通过T载体直接克隆和测序分析。在探讨两个相关组织或两个关联过程中基因表达差异的情况，通过该方法可以获得某些基因在某一样品中表达，而在对应的样品中不表达或表达量很低。
该方法也可以用于基因组特异片段的筛选，差别在于前者用mRNA为实验材料，后者用基因组DNA或其它可比样品的DNA为材料，两者的后半部分实验内容*相同，前者得到的主要是差异表达的基因，后者得到的主要是差异片段。

客户需提供两个样品确实存在显著差异的证据，并告知打算得到哪个样品中被上调或下调的基因。如果同时想知道上调和下调的基因，则相当于两个服务，价格加倍。
实验结束后我们会提供筛选到的含有差异基因的质粒，用两个样品制备的cDNA制备的探针对筛选到的差异克隆进行Southern鉴定的图片一幅，以及简明实验步骤。