土壤过氧化氢酶试剂盒说明书
时间:2017-09-20 阅读:523
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齐一生物科技(上海)有限公司 -
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523次土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类,在H2O2清除系统中具有重要作用。
测定原理:
H2O2在 240nm下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即
可反应 S-CAT活性的高低。
土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒说明书 需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水
试剂组成和配制:
试剂一:液体 100μL×5 瓶,4℃保存;临用前每瓶加入 9.9mL蒸馏水充分溶解后待用;用不
完的试剂 4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入 2mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 4℃保
存;
试剂三:液体6mL×1 瓶,4℃保存。
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
试剂名称 测定管 无基质管 无土管
风干土样(g) 0.1 0.1
试剂一(μL) 1000 1000
双蒸水(μL) 1000
25℃振荡培养 20min
试剂二(μL) 25 25 25
混匀 8000g,25℃离心5min,取 820μL上清
试剂三(μL) 96 96 96
混匀,用蒸馏水调零,240nm处记录各管 A值。
土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒说明书 注意:每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做一管。
S-CAT 活性计算:
单位的定义:每天每 g风干土样催化 1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷(ε×d)
×106
]÷W÷T=18.9×(A无土管-A测定管+A无基质管)
V反总:反应体系总体积,1.145×10-3
L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,4.36×104
L / mol /cm;
d:比色皿光径,1cm; T:反应时间,20 min=1/72d; W:样本质量,0.1g。
土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒说明书