β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒说明书                                   分光光度法 50 管/24 样 
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 
测定意义： 
淀粉酶负责水解淀粉，主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于
淀粉中的 α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。 
测定原理： 
还原糖还原 3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上
述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。 
β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒说明书    需自备的仪器和用品： 
可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。 
试剂的组成和配制： 
试剂一：50mL×1瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需 90℃加热溶解后再用； 
试剂二：40mL×1瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需 70℃加热后再用。 
粗酶液提取： 
组织：称取 0.1~0.2g 样本（建议称取约 0.1g 样本），加入 1mL 蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆
倒入离心管中，提取液在室温下放置提取 15min，每5min振荡 1 次，使其充分提取；3000g，
25℃离心 10min，取上清液加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，即淀粉酶原液。 
吸取上述淀粉酶原液1mL，加入 4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α＋β）淀
粉酶总活力的测定。 
血清（浆）等液体样本： （1）直接检测 α-淀粉酶。 （2）吸取淀粉酶原液 1mL，加入4mL蒸
馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α＋β）淀粉酶总活力的测定。 
 
β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒说明书    测定步骤： 
1、 分光光度计预热 30min以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。 
2、 试剂一和试剂二 40℃预热10min。 
3、测定操作表： 
试剂名称（μL）  α-淀粉酶活力测定  总淀粉酶活力测定 
对照管  测定管  对照管  测定管 
淀粉酶原液  250  250     
70℃水浴 15min左右，冷却 
淀粉酶稀释液      250  250 
蒸馏水  250    250   
试剂二    250    250 
在 40℃恒温水浴中准确保温 5min 
试剂一  500  500  500  500 
混匀，95℃水浴 5min，冷却，在 540nm下测定吸光度，从左到右分别记为 A1、A2、A3和
A4。 
酶活性计算： 
1、标准条件下测定回归曲线为 y=3.7215x -0.1778；  x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。  
2、α-淀粉酶活性
（1）按照样本质量计算 
单位定义：每 g组织每分钟催化产生 1mg还原糖定义为 1 个酶活力单位。 
α-淀粉酶活性(mg/min/g鲜重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T 
=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W 
（2）按照蛋白质含量计算 
单位定义：每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1mg还原糖定义为 1个酶活性单位。 
α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷（V样×Cpr）÷T 
=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr 
（3）血清（浆）等液体样本中α-淀粉酶活性计算 
单位定义：每 mL血清（浆）每分钟催化产生 1mg还原糖定义为1 个酶活性单位。 
α-淀粉酶活性(mg/min/mL)=  [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷V 样÷T=0.1075×(A2-A1＋
0.1778)   
3、总淀粉酶活性计算 
（1）按照样品质量计算 
单位定义：每 g组织每分钟催化产生 1mg还原糖定义为 1 个酶活力单位。 
总淀粉酶活性(mg/min//g 鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样
总)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W 
（2）按照蛋白质含量计算 
单位定义：每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1mg还原糖定义为 1个酶活力单位。 
总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷（V样×Cpr）÷T 
=0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr 
（3）血清（浆）等液体样本中总淀粉酶活性计算 
单位定义：每 mL血清（浆）每分钟催化产生 1mg还原糖定义为1 个酶活性单位。 
总淀粉酶活性(mg/min/mL) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V反总]÷V样÷T 
=0.5375×(A4-A3＋0.1778) 
4、β-淀粉酶活性计算 
（1）按照样本质量计算 
单位定义：每 g组织在反应体系中每分钟催化产生 1mg还原糖定义为 1 个酶活力单位。 
β- 淀 粉 酶 活 性 (mg/min/g 鲜 重 )= 淀 粉 酶 总 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =[5.375×(A4-A3 ＋
0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W 
（2）按照蛋白质含量计算 
单位定义：每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1mg还原糖定义为 1个酶活力单位。 
β-淀粉酶活性（mg/min/mg  prot）=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋
0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)]÷Cpr 
（3）血清（浆）等液体样本中β-淀粉酶活性计算 
单位定义：每 mL血清（浆）每分钟催化产生 1mg还原糖定义为1 个酶活性单位。 
β- 淀 粉 酶 活 性 （ mg/min/mL ） = 淀 粉 酶 总 活 性 -α- 淀 粉 酶 活 性 =0.5375×(A4-A3 ＋
0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778) 
5：总淀粉酶稀释倍数；V 反总：反应体系总体积，0.5mL；V 样：加入反应体系中样本体
积，0.25 mL；V样总：提取液总体积，10 mL；  Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本
质量，g；T：反应时间，5min。