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蔗糖(sucrose)含量试剂盒齐一生物资料

时间:2017-09-15      阅读:605

蔗糖(sucrose)含量试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测

蔗糖(sucrose)含量试剂盒说明书测定意义:

蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对 于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质 量控制的重要指标之一。
测定原理:

先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖, 果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰。 所需的
仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
蔗糖(sucrose)含量试剂盒说明书试剂的组成和配制:

提取液:液体 100ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存; 
试剂二:液体 2.5ml×1 瓶,4℃保存; 
试剂三:液体 40ml×1瓶,4℃保存; 
试剂四:液体 10ml×1 瓶,4℃保存; 
试剂五:粉剂 0.5g×1 瓶,常温保存。
蔗糖提取:

称取 0.1~0.2g 样本,常温研碎,加入 1mL 提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于 80℃水浴锅中 10min,振荡 3~5 次,冷却后,4000g,25℃离心 10min,取上清,加入
2mg 试剂五,80℃脱色 30min,再加入 1mL 提取液,4000g,25℃离心 10min,取上清液测定。
测定操作表(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):

    试剂(μL)        空白管            标准管    测定管
                            
    样本                        100
                            
    试剂一                    100    
                            
    蒸馏水        100                
试剂二    50    50        50
                
    混匀,沸水浴煮沸 5min 左右(盖紧,防止水分散失)    
                
试剂三    700    700        700
试剂四    200    200        200

混匀,沸水浴 30min,冷却后 480nm 处蒸馏水调零,空白管、标准管和测定管分别记为

A1、A2 和 A3。

蔗糖(sucrose)含量试剂盒说明书蔗糖含量计算:

 1、按照蛋白质含量计算

蔗糖含量(mg/mg prot)=(C 标准管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行测定蛋白浓度。
2、按照样品质量计算

蔗糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。 C 标准管:标准管浓度,1mg/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

注意:zui低检测限为 100ng/g 鲜重或 1ng/mg prot

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