葡萄糖含量试剂盒说明书（测组织、细菌或细胞）

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
葡萄糖含量试剂盒说明书测定原理：

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水

试剂的组成和配制：

试剂一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 25ml×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 25ml×1 瓶，4℃保存；
葡萄糖提取：

1、组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。

2、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次），95℃水浴 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。
葡萄糖含量试剂盒说明书测定步骤：

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。

2、混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合，用多少配多少。

3、加样表（在 EP 管中加入下列试剂）：
试剂（μL）    空白管    标准管    测定管
样本            100
试剂一        100    
蒸馏水    100        
混合试剂    900    900    900

混匀，置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴中，保温 15min，于 505nm 波长处读取吸光度。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为 A1、A2 和 A3。空白管和标准管只要做一管。
葡萄糖含量计算：

1、按样本蛋白浓度计算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷Cpr。
2、按样本鲜重计算
葡萄糖含量（µmol/g 鲜重）= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷

(A2-A1)÷W

3、按细菌或细胞密度计算

葡萄糖含量（µmol/ 104 cell)= (C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷

(A2-A1)

C 标准：标准管浓度，0.5µmol/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

注意：

1、zui低检测限为 50nmol/g 鲜重或 0.5nmol/mg prot

2、若样本中存在葡萄糖氧化酶抑制剂，则会造成测定结果偏低，建议改用 HPLC 法测定。