正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

4CL 是连接苯丙酸途径与木质素特异合成途径的关键酶，主要催化肉桂酸生成相应的肉桂酸辅酶 A 酯，是合成木质素与其他苯丙烷类化合物的代谢流向调控点。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理， 为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。

测定原理：

4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA，在 333nm 下测 4-香豆酸 CoA 生成速率，即可反映 4CL 活性。

粗酶液提取：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔10s，重复30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪 40℃预热 30min 以上，调节波长至 333nm，蒸馏水调零。

2、 准备 96 孔 UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，

检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板）。

3、 样本测定

（1） 在试剂二中加入 10mL 试剂一充分溶解混匀，置于 40℃水浴预热 10min；现配现用

（ 配好后 24h 内用完）；

（2） 在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μL 样本和 190μL 试剂二，混匀，立即记录 333nm 处初始吸光值 A1 和 40℃反应 30min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。

齐一生物提供4-香豆酸：辅酶 A 连接酶（ 4-coumarate:CoA ligase，4CL)测定试剂盒及相关代测服务，也提供木质素单体液相法代测服务，我司主要经营进口原装Elisa试
剂盒，自产品牌QIYBIO试剂盒，种类齐全，价格实惠，凡购买我公司产品的新老客户，可咨询我公司!