REAGEN^™ 卡那霉素酶联免疫反应试剂盒

RND99033

1．概述

REAGEN^™ 卡那霉素酶联免疫反应测试盒是用于肾脏、肝脏、肌肉（牛肉、鸡肉和猪肉）、细胞裂解液、血、尿、牛奶中卡那霉素残留的定量检测。该试剂盒有以下特点：

• 快速(10-40分钟)，多种样品的非有机溶剂的提取方法，高回收率(>80%)。
• 高灵敏度（0.2ppb）。
• 高重复性。
• 快速的ELISA检测方法（不考虑样本量的前提下只需不到1小时）。

2.试剂盒原理

REAGEN^™ 卡那霉素酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，抗原已经包被于微孔板上。分析时，样品、酶标物以及抗体加入孔中，如果样品中含有药物，会与微孔板上的抗原竞争抗体，同时酶标物与抗体结合。加入TMB底物，底物的颜色显色强度与样品中毒素的含量成反比。

3.试剂盒组成

已包被抗原的酶标板(Kanamycin-coated Plate)（可拆式） 1×96孔

标准液(Standards)（0，0.2，0.6，1.8，5.4，16.2ppb） 6×1.0mL

高标液1000ppb（Spiking） 1×1.0mL

一抗(Antibody #1) 1×6.0mL

HRP酶标二抗(HRP-Conjugated Ab#2) 1×6.0mL

10×样品稀释液（10×Sample diluent） 1×15mL

20×浓缩洗液(Wash Solution) 1×28mL

TMB底物(TMB Substrate) 1×12mL

终止液(Stop Buffer) 1×12mL

10×样品提取液(10×Sample Ext. Buffer)（可选） 1×15mL

样品平衡液（Sample Balance buffer） 1×2.0mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过1个月不使用试剂盒，请

将标品、一抗和二抗放置-20℃或者冰冻保存。

4.检测限

5.交叉反应

6.未提供的设备或材料

• 酶标仪
• 组织匀浆器
• 漩涡振荡器
• 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
• 多道移液器（50-300mL）

7.注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得佳实验效果。

• 标准品中含有卡那霉素，请小心使用。
• 不要使用过期的试剂盒。
• 不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。
• 尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热或者蒸发。同样的，不

要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

• 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。
• 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。
• 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。
• 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。
• 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

8.样品的准备

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

• 准备1×样品稀释液:

1体积 10×样品稀释液加9体积蒸馏水稀释。

• 准备1×样品提取液: 

1体积10×样品提取液加9体积蒸馏水稀释。

细胞裂解液

• 取100mL细胞裂解液，加900mL 1×样品稀释液，混匀；
• 离心5分钟，4000×g；
• 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数:10

鱼/虾肉/肝/肾

• 称取 1.0 g 匀浆样品，加 4mL的1×样品提取液；
• 涡流振荡1分钟；离心5分钟，4000×g；
• 取200mL上清液到干净的新管中，加入1.375mL 1×样品稀释液和25mL样品平衡液，涡流混匀30秒。
• 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数：40

血清/尿

• 取50mL样品，加1.2mL 1×样品稀释液，混匀；
• 离心5分钟，4000×g；
• 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数：25

鲜奶

• 取100mL鲜奶到一干净离心管，加900mL 1×样品稀释液；
• 漩涡震荡30秒；
• 在4,000 x g离心10分钟；
• 每孔取50mL上清液来检测。

稀释倍数：10

9.检测步骤

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

• 1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合。

检测

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

• 加入50mL的标准品于所设定的孔中；
• 加入50mL的样品于所设定的孔中；
• 按顺序在每孔中加入50mL HRP酶标二抗和50mL一抗，轻敲微孔板边缘混匀30秒；
• 室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；
• 洗板4次，每次应该加入250mL 1×洗液，一次使板尽量甩干并在吸水纸上拍干；
• 加入100mL的TMB底物；计时，轻敲微孔板边缘混匀30秒；
• 在室温（22.5±2.5）°C避光孵育15分钟，加入100mL的终止液终止反应；
• 在450nm下读OD值 (读数前，用无绒布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。

10.结果计算

• 分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

• 以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。
• 从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

以下曲线图是卡那霉素酶联免疫反应测试盒典型标准曲线