亚硝酸还原酶酶活测定-齐一生物
时间:2019-06-11 阅读:1907
测定意义
硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为 NO 或 NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理
亚硝酸还原酶可将 NO2—还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2—减少,即 540nm 处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿
酶液提取
1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
测定操作表
见详细说明书
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