腺病毒igg抗体检测试剂盒

【产品名称】

通用名称：腺病毒IgG检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：NovaLisa® Adenovirus IgG ELISA

【产品规格】

96T

【预期用途】

本试剂盒可用于定性检测人血清或血浆（柠檬酸盐、肝素）中抗腺病毒igg的特异性抗体。

【前言简介】

腺病毒是一种长度约为70-90纳米的双链DNA病毒。衣壳包含252个壳粒，呈二十面体对称。衣壳由六邻体、戊邻体和纤维蛋白三聚体组成，它们负责诱导群型和类型特异性抗体。1953年，Rowe从扁桃体和腺样组织中分离出腺病毒。目前已知的有80多种腺病毒。其中47例对男性有致病性。它们会引起多种不同器官系统的疾病，主要是眼睛、咽、呼吸和胃肠道系统。腺病毒感染是一种常见和常见的疾病，腺病毒igg的确认可以有利于该病毒感染的早发现早确认，缩短疾病窗口期以阻止重症的可能性。大多数感染出现在儿童时期。它们潜伏通过，以便两年后仍能在扁桃体中检测到病毒。它通过唾液和粪便排泄。到身体的大门是口腔、鼻咽和眼的结膜。大多数感染在传播时都没有出现任何症状，但可以检测到腺病毒igg。大约5%的儿童咳嗽和打喷嚏是由腺病毒引起的。流行病可能发生在拥挤的人群中，例如军人群体中的急性呼吸道疾病、游泳池中的咽结膜热和医疗设施中的流行性角膜结膜炎。医院和游泳池的感染满足了对卫生学的特殊要求。

【检测原理】

特异性腺病毒igg抗体的定性免疫酶学测定是基于ELISA（酶联免疫吸附试验）技术。微孔板上包被特定的抗原，以结合样品的相应抗体。洗涤微孔以去除所有未结合的样品材料后，添加酶联物，与捕获的抗体结合。在第二个洗涤步骤中，未结合的共轭物被去除。通过加入四甲基联苯胺(TMB)底物，得到蓝色反应产物，可以观察到结合结合物形成的免疫复合物。该产品的强度与样品中特异性抗体的数量成正比。加入终止液以终止反应，蓝色变成了黄色。使用酶标仪器读取450/620nm处的吸光度从而判断腺病毒igg的存在。

【试剂盒组成】

1）微孔板                12x8，包被腺病毒抗原

2）样品稀释液          1×100ml，磷酸盐缓冲液（10mM），pH 7.2 ± 0.2，即用型

3）终止液     1×15ml，硫酸，0.2mol/L，即用型

4）洗涤浓缩液   20倍浓缩，磷酸盐缓冲液（0.2M），1×50ml，pH 7.2 ± 0.2

5）酶联物     1×20ml，过氧化物酶标记的人IgG抗体，即用型

6）底物液     1×15ml，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB），即用型

7）阳性质控    1×2ml，即用型

8）临界质控    1×3ml，即用型

9）阴性质控    1×2ml，即用型

10）封板纸     1x

11）使用说明书   1x

【所需的材料和设备】（未提供）

1）酶标仪

2）37℃培养箱

3）手动或自动洗板装置

4）移液器：10-1000µL

5）涡旋混合器

6）蒸馏水

7）一次性试管

【储存条件】

腺病毒igg抗体检测试剂盒必须储存于2-8℃的环境中，打开的试剂在标签上规定的有效期内是稳定的。

【试剂准备】

将所有的试剂和样品平衡至室温(20-25°C)，并在开始测试运行前进行混合是非常重要的！有将有利于对腺病毒igg的检测实施。

洗涤液

用蒸馏水根据1+19稀释洗涤浓缩液，例如，10 mL洗涤浓缩液+190mL蒸馏水混合。稀释的洗涤液在室温下（20-25℃）可保存5天，如果在浓缩液中出现晶体，则将溶液加热至37°C，例如在水浴中。稀释前搅拌均匀。

底物液

试剂为即用型，不需要稀释。必须储存在2-8°C，避光。溶液应该是无色的，或者可以有一个轻微的蓝色色调。如果基质变成蓝色，它可能已经被污染了，应该被扔掉。

【样品采集和制备】

使用人血清或血浆（柠檬酸、肝素）样品。如果在样品采集后5天内进行检测，样品应保持在2-8°C；否则应分装并深度冷冻保存(-70至-20°C)。如果样品是冷冻保存的，在检测前将解冻的样品混合。避免反复冻结和解冻。不建议对样品进行热失活。

样品稀释

腺病毒igg检测前，所有样品应用IgG样品稀释缓冲液稀释1+100。将10µL样品和1 mL IgG样品稀释缓冲液加入试管中，涡旋混匀。

检测步骤

1）加100µL标准品或质控品和稀释的样品至相应的微孔中，保留A1为空白对照。

2）用提供的封板纸封板。

3）37± 1 °C孵育1小时± 5 分钟。

4）弃掉微孔中的内容物，用稀释的洗涤液冲洗孔3次(每次每孔300µL)。洗涤和吸入的时间间隔应>5s。在吸水纸上用力击打微孔板，以去除残留的液滴。

5）加100µL酶联物至每个微孔中，除了空白孔。

6）室温下（20-25℃）避光孵育30分钟。

7）重复步骤4。

8）加100µL底物液至每个微孔中。

9）在黑暗环境中室温下孵育15分钟。

10）加100µL终止液至每个微孔中。

11）在加入终止液溶液后的30分钟内，用酶标仪读取在450/620nm处的吸光度可以判断腺病毒igg的检测结果。

【测量方法】

使用空白对照孔，将酶标仪调零。

如果由于技术原因，酶标仪不能使用孔板空白值调零，则从所有其他测量的吸光度值中减去其吸光度值，以获得可靠的结果！

在450nm处测量所有孔的吸光度，并在微孔板布局中记录每个标准/质控和样品的吸光度值。

推荐使用620nm的参考波长进行双色测量。

【结果】

运行验证标准：

为了使试验运行有效，必须严格遵守这些使用说明，并必须满足以下标准：

空白对照：吸光度值<0.100

阴性质控：吸光度值<0.200和<临界值

临界质控：吸光度值0.150-1.300

阳性质控：吸光度值>临界值

如果不满足这些标准，则该检测无效，必须重复检测。

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