SDS-PAGE十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳测量蛋白含量
时间：2024-12-16 阅读：68
原理
根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离。蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。
SDS-PAGE是在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阳离子去污剂(SDS)--SDS能断裂分子内和分子间氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质的二级和三级结构；分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷具有相同密度，且大大超过了蛋白原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。多肽结合SDS的量只与其分子量成正比，而与多肽序列无关，所以SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX。式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
操作步骤
1、凝胶的制备，包括分离胶和浓缩胶(也可直接购买成品胶)
2、电泳步骤：处理样品——上样——加入缓冲液——接通电源进行电泳——凝胶板剥离——染色——脱色——漂洗——拍照——实验结果分析