基于比色度/荧光性的蛋白定量方法(总蛋白质/肽含量)
时间：2024-08-21 阅读：481
基于比色度/荧光性的蛋白定量方法(总蛋白质/肽含量)：
一、BCA法(测定范围：5~2000 pg/ml)：基于比色度的蛋白定量方法
原理
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+。二喹啉甲酸及其钠盐是一种溶于水的化合物，在碱性条件下，可以和Cu+结合生成深紫色的化合物，这种稳定的化合物在562nm处具有强吸收值，并且化合物颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。故可用比色的方法确定蛋白质的含量。
操作步骤
1、绘制标准曲线
以牛血清白蛋白含量为横坐标，以吸光值为纵坐标。
2、样品测定
向样品中加入BCA试剂，摇匀，于37℃保温30min，冷却至室温后在595nm处比色。
3、根据样品的吸光值从标准曲线上查出样品的蛋白质含量。
样品测定浓度范围：在5~2000 ug/ml
标准方案：37°C，30分钟(检测范围=20-2000ugmL)
室温方案：室温，2小时(检测范围=20-2000ug'mL)
增强方案：60°C，30分钟(检测范用=5-250mg/mL)
二、Qubit® 法(测定范围：12.5 μg/mL~5mg/mL)：基于荧光性的蛋白定量方法
原理
Qubit@ 分析试剂盒测定样品中的可溶性蛋白。靠荧光染料与蛋白质特意结合后发出荧光，再检测产生荧光量的多少来定量。这个方法能把蛋白质与DNA、RNA、降解核酸、游离核苷酸及其它杂质区分开采用。
操作流程
1、建立标准曲线----样品处理---读取分析数据；
2、Qubit® 分析试剂盒，能精确定量样品初始浓度范围为:12.5 ug/mL~5mg/mL的蛋白质样本。
