麦芽糖含量高效液相色谱法测定-齐一生物
时间:2020-09-10 阅读:3694
麦芽糖含量测定意义:
麦芽糖是淀粉、糖原、糊精等大分子多糖类物质在β-淀粉酶催化下的主要水解产物,再经麦芽糖酶催化,则被水解成两个 D-葡萄糖分子。麦芽糖可用作甜味剂,是一种廉价的营养食品,容易被人体消化和吸收,广泛应用于食品行业,测定食品中麦芽糖含量具有重要意义。
麦芽糖含量测定原理:
利用示差折光检测器测定麦芽糖含量。
麦芽糖的提取:
1、组织的处理:按照组织质量(g):超纯水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.2 g组织,加入 2mL 超纯水),匀浆,倒入 2mLEP 管中,8000g 4℃离心 10 min,取上清液,调 PH 值至 5-9,水系针头式过滤器过滤后待测。
2、液体样品:取 2mL 液体样品,调 PH 至 5-9,水系针头式过滤器过滤后待测。
麦芽糖含量标准品的配制:
麦芽糖含量测定操作步骤:
1.开启电脑、泵、检测器和自动进样器,用超纯水冲洗仪器,冲洗体积为100mL,必须保 证整个线路中充满水,不能把有机相带入色谱柱。
2.安装上色谱柱,放入柱温箱,设置流速0.2 mL/min,冲洗5min后,设置柱温为85℃,待
温度升到所需温度后,逐渐提高流速至0.6mL/min,并注意柱压不超过1000psi。
3.设置进样量 10 μL,流速 0.6 mL/min,保留时间 15min。待流速达到 0.6mL/min 后,查看基线。
4.待基线稳定后上样检测,先加入标准品 10 μL,麦芽糖的保留时间在 9min 左右,(仪器和检测环境不同,保留时间有差异),计算不同浓度的麦芽糖标准品的峰面积;加入样品 10 μL, 在相应保留时间处检测麦芽糖的峰面积。
5.测定结束后,调整流速为0.2mL/min,关闭柱温箱的加热系统;待柱温降到40℃以下,
停止流动相。
麦芽糖含量的计算:
以标准品浓度(mg/mL)为横坐标,峰面积为纵坐标计算麦芽糖标准曲线。将样品峰面积代入标准曲线,计算样品麦芽糖含量。
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