α-酮戊二酸含量测定操作说明书-齐一生物
时间:2020-09-04 阅读:3350
α-酮戊二酸是微生物三羧酸循环中重要的代谢中间产物,是连接细胞内碳-氮代谢的关键节点,在循环中的位置位于异柠檬酸之后以及琥珀酰辅酶 A 之前。在这一部位,回补反应可以通过自谷氨酸的转氨基作用产生α-酮戊二酸而达到补充此中间代谢产物的目 的。
α-酮戊二酸含量测定原理:
α-酮戊二酸与衍生剂反应,产生紫外下有吸收的物质,利用高效液相色谱法分离,紫 外检测器测定其含量。
α-酮戊二酸含量测定需自备的实验用品:
高效液相色谱仪(C18 柱,紫外检测器)、低速离心机、超声波清洗器、溶剂抽滤装置、滤膜(水系和有机系各 1 个,0.45μm)、针头式过滤器(水系,50 个,0.22μm)、可调式移液器、样品瓶(50 个,2mL)、甲醇(色谱级)、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和超纯水。
试剂的组成和配制:
实验前的准备工作:
α-酮戊二酸的提取:
称取约 0.2g 样本,放入研钵中磨碎,加入 0.2mL 预冷的试剂一,以及 0.5mL 预冷的超纯水, 移入 EP 管内,4 oC 浸提 60min,10000g,4 oC 离心 10min,提取上清液。
α-酮戊二酸的衍生反应:
α-酮戊二酸含量标准品的配制:
齐一生物拥有多台高效液相色谱仪、气象色谱仪、液质联动仪,可以提供完善的代测检测服务。能为各位老师、同学提供完善的检测服务,提供全套图谱、原始数据和全套检测计算过程及结果。