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本网站销售的所有产品均不得用于人类或动物之临床诊断或治疗,仅可用于工业或科研等非医疗目的。
货号 | 产品名称 | 规格 |
AS632179 | 超氧阴离子清除能力测试盒(比色法) | 100管/96样 |
AS632179 | 超氧阴离子清除能力测试盒(比色法) | 50管/48样 |
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基,可攻击生物大分子,如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等,使其交链或者断裂,引起细胞结构和功能的破坏,与机体衰老和病变有很密切的关系,清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。
测定原理
AP-TEMED系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-与对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体1.5mL×1支,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加6mL蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体7.5mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体7.5mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂五:液体7.5mL×1瓶,4℃避光保存。
样品处理
组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
培养液或其它液体:直接检测。
粉剂药物可配制成相同浓度,比如1mg/mL。
测定操作
对照管 | 测定管 | |
试剂一(μL) | 10 | 10 |
试剂二(μL) | 40 | 40 |
H2O(μL) | 25 | |
充分混匀,25℃反应1min | ||
样品(μL) | 25 | |
试剂三(μL) | 50 | 50 |
充分混匀,37℃反应30min | ||
试剂四(μL) | 50 | 50 |
试剂五(μL) | 50 | 50 |
充分混匀,37℃显色20min,于微量石英比色皿/96孔板,在530nm处测定对照管和测定管的吸光值,分别记为A对照管和A测定管。 |
注意:对照管只需测定一次。
计算公式
超氧阴离子清除率 I%=
注意事项
试剂一4℃可保存2个月,配制好的试剂二4℃可保存一周,建议实验前配制,并尽快使用。
样品处理完后立即进行测定,或者低温保存不超过24小时。
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