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货号 | 产品名称 | 规格 |
AS632170 | 植物原花青素(OPC)测试盒(比色法) | 100管/48样 |
AS632170 | 植物原花青素(OPC)测试盒(比色法) | 50管/24样 |
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
原花青素(Oligomeric Proantho Cyanidins,OPC)是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物,广泛存在于植物的各种器官中,具有的抗氧化性和清除自由基的作用,广泛的应用于医药,食品,化妆品,保健品行业。
测定原理:
在酸性条件下,植物原花青素A环上的与发生缩合反应,产生有色化合物,在500nm处有特征吸收峰,测定500nm光吸收值,可计算植物中原花青素的含量。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。
试剂组成和配制:
提取液:60%乙醇,自备,4℃保存。(60mL无水乙醇溶于40mL蒸馏水)
试剂一:8%盐酸10mL,自备,4℃保存。(800μL盐酸溶于9.2mL甲醇)
试剂二:粉剂0.1g×1瓶,4℃避光保存,临用前加10mL甲醇溶解。
测定工作液:临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。
空白工作液:临用前按照用量将试剂一和甲醇按照1:1混合。
OPC提取:
称取约0.1g样本,加入2mL提取液,匀浆后,60℃振荡提取2h, 10000g,25℃,离心10min,取上清待测。
测定操作表:
分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至500nm,蒸馏水调零。
操作表
对照管 | 测定管 | |
样本(μL) | 40 | 40 |
测定工作液(μL) | 160 | |
空白工作液(μL) | 160 | |
混匀,30℃水浴30min,于微量石英比色皿/96孔板中检测500nm处吸光值,ΔA=A测定-A对照,每个测定管设一个对照管。 |
OPC计算公式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0194x+0.0006,R2=0.999
OPC含量(mg/g 鲜重)= (ΔA-0.0006)÷0.0194×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3
= 0.515×(ΔA-0.0006)÷W
V样总:加入提取液体积,2mL; V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样品体积,0.04mL;W:样品质量,g
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y=0.0097x+0.0006,R2=0.999
OPC含量(mg/g 鲜重)= (ΔA-0.0006)÷0.0097×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3
= 1.03×(ΔA-0.0006)÷W
V样总:加入提取液体积,2mL; V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样品体积,0.04mL;W:样品质量,g
注意事项:
1、配制好的试剂二应尽快使用,4℃保存时间不超过一个月。
2、吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
3、检出限为10μg/g。
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