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注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。

测定原理:

在酸性条件下，植物原花青素A环上的与发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。

自备实验用品及仪器:

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。

试剂组成和配制:

提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。（60mL无水乙醇溶于40mL蒸馏水）

试剂一：8%盐酸10mL，自备，4℃保存。（800μL盐酸溶于9.2mL甲醇）

试剂二：粉剂0.1g×1瓶，4℃避光保存，临用前加10mL甲醇溶解。

测定工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。

空白工作液：临用前按照用量将试剂一和甲醇按照1:1混合。

OPC提取:

称取约0.1g样本，加入2mL提取液，匀浆后，60℃振荡提取2h， 10000g，25℃，离心10min，取上清待测。

测定操作表:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2. 操作表

OPC计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0194x+0.0006，R2=0.999

OPC含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3

    = 0.515×(ΔA-0.0006）÷W

V样总：加入提取液体积，2mL； V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0097x+0.0006，R2=0.999

OPC含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3

= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W

V样总：加入提取液体积，2mL； V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g

注意事项：

1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。

2、吸光度变化应该控制在0.01～0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

3、检出限为10μg/g。

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