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本网站销售的所有产品均不得用于人类或动物之临床诊断或治疗,仅可用于工业或科研等非医疗目的。
货号 | 产品名称 | 规格 |
AS6321126 | ATP含量测试盒(比色法) | 100管/48样 |
AS6321126 | ATP含量测试盒(比色法) | 50管/24样 |
测定意义:
ATP广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物能量通货,能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
测定原理:
肌酸激酶催化肌酸和ATP反应生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量,以此反应ATP含量。
自备仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制:
酸性提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
碱性提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂二:液体1.5mL×1支,4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入500μL蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体25mL×1瓶,4℃保存;
标准液:液体10mL×1瓶,2μmol/mLATP标准液,4℃保存;
ATP提取:
1、血清(浆)中ATP的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取约0.1mL血清(浆),加入1mL酸性提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4 ℃离心10min;取上清液至另一EP管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
2、组织中ATP的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL酸性提取液),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清至另一EP管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
3、细胞或细菌中ATP的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104个):酸性提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL酸性提取液),超声波破碎1min(冰浴,强度20%或200W,超声2s,停1s),8000g 4 ℃离心10min;取上清液至另一EP管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,混匀,8000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30 min以上,调节波长到700nm,蒸馏水调零。
2、显色剂的配制:临用前请根据拟用显色剂体积(样本数×0.2 m L),按试剂四(mL):试剂五(mL)=1:5的比例配制。用多少配多少。
3、样本测定:
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 10 | 10 | ||
标准液 | 10 | 10 | ||
试剂一 | 20 | 20 | ||
试剂二 | 10 | 10 | 10 | 10 |
试剂三 | 10 | 10 | ||
蒸馏水 | 30 | 30 |
充分混匀,37℃准确水浴30min
显色剂 | 200 | 200 | 200 | 200 |
37℃水浴20min后,700nm下测定各管吸光值
注意:空白管和标准管通常只需要各做一个。每个测定管设一个对照管。
ATP含量计算:
1、血清(浆)中ATP含量计算
ATP含量(μmol/mL)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=40×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
2、组织、细菌或细胞中ATP含量计算
(1)按蛋白浓度计算
ATP含量(μmol/mg prot)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr)=2×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
蛋白质含量需要另外测定。
(2)按样本鲜重计算
ATP含量(μmol/g鲜重)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=4×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
ATP含量(μmol/104 cell)=[C标准管×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)=0.008×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准管:标准液浓度,2μmol/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。
注意:检测限为10nmol/mL或10nmol/g鲜重或0.1nmol/mg prot
公司正在出售的产品:
DBH ELISA Kit | ATP结合盒转运蛋白A3ELISA试剂盒 |
anti-papillomavirus type 17(HPV17)antibody(IgG)ELISA Kit | c-Jun氨基末端激mei/应急激活的蛋白meiELISA试剂盒 |
CD10分子ELISA试剂盒 | Derlin2蛋白ELISA试剂盒 |
Cullin5蛋白ELISA试剂盒 | G蛋白α抑制活性多肽3ELISA试剂盒 |
大鼠前心钠肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒 | 大鼠补体蛋白4(C4)ELISA检测试剂盒 |
腺苷suan环化mei9ELISA试剂盒 | 人组织蛋白meiB(CTSB)ELISA试剂盒 |
人白介su3(IL-3)试剂盒ELISA | EJ抗体/抗甘氨酰tRNA合成mei抗体ELISA试剂盒 |
鸡脂多糖/内毒su(LPS)检测试剂盒elisa | 绵羊星状病毒1型RT-PCR试剂盒 |
滑液支原体PCR检测试剂盒 | 胎儿弯曲杆菌PCR试剂盒 |
马毛癣菌PCR试剂盒 | 麝源性成分PCR试剂盒 |
克氏食道线虫PCR检测试剂盒 | 花椒探针法PCR鉴定试剂盒 |
链状带绦虫PCR检测试剂盒 | Hsp-60 大鼠热休克蛋白60ELISA检测试剂盒 |
BNP 人脑钠su/脑钠尿肽ELISA检测试剂盒 | 花生PCR检测试剂盒 |
BMPR-Ⅱ 小鼠骨成型蛋白受体ⅡELISA检测试剂盒 | 索氏梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒 |
型受体α7(CHRNα7)ELISA试剂盒 | BLI 小鼠β内酰胺抑制剂ELISA检测试剂盒 |