伪狂犬病毒抗体检测试剂盒说明书

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【原理】

       猪伪狂犬是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）引起的家畜和多种野生动物发生一种急性传染病。该病以发热、奇痒、呼吸和神经系统疾病为主要特征。患病动物病死率高，但成年猪死亡率低，也不发生奇痒，妊娠母猪可导致流产、产死胎和木乃伊胎，新生仔猪和断奶仔猪死亡率较高。检测特异性抗猪伪狂犬病毒抗体，可作为猪场伪狂犬疫苗的免疫监测及该病辅助检测指标。

        本试剂盒采用ELISA方法检测猪血清中特异性抗伪狂犬病毒IgG抗体。本试剂灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便快速，可分多次使用。

【试剂组成】

【操作程序】

1．洗涤液配制 用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释，如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水充分混匀即为工作洗涤液。

2．样本稀释   用样本稀释液（5号液）将待检血清样本按1：100稀释，如取5ul样本与495ul样本稀释液，混匀。阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3．加样反应   每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100ul）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100ul。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，每孔注满工作洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟后再甩净，拍干。

4． 加酶反应   除空白对照孔外，每孔加酶结合物（1号液） 1滴。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5．显色反应   加底物液（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃避光显色10分钟。加终止液（6号液）1滴，终止反应（加终止液后，蓝色会变为黄色）并判读结果。

【结果判断】

        阴性对照呈无色或浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。

        以空白对照调零，用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度（A值）。待检孔A值大于阴性对照A值平均值的2.1倍者判为阳性。如阴性对照A值的平均值低于0.08时按0.08计算。

【注意事项】

       1.试剂盒于2-8℃保存，有效期12个月。每次使用前应先平衡至室温。

       2.未使用完的板条应密封保存。

       3.试剂盒中终止液具有腐蚀性，要小心使用。

       4.瓶盖每次使用后要拧紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

       5.试验样本应为无染菌、无血脂、无溶血的血清。任何样本都应视为传染源妥善处理。

       6. 37℃孵育时，建议使用水浴箱。如无条件，可在温箱中放置湿盒进行反应并同时用不干胶膜封盖板孔。

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