美国INBIOS黑热病抗体快速检测试剂卡

【预期使用】

   该检测条用于诊断内脏利什曼病，利用快速的免疫层析法在人血清中定性检测杜氏利什曼原虫（L. donovani）抗体。该实验有助于诊断内脏利什曼病（VL）。并只用于体外诊断。

【实验原理】

   该检测条的硝化纤维膜在实验区包被了rK39，在质控区包被了鸡抗蛋白A。在实验中，血清样本与胶体金共轭物（胶体金标记的蛋白A）反应，而胶体金共轭物预先包被在检测条上。混合物在毛细管作用下沿着硝化纤维膜移动，然后与重组的VL抗原反应，并生成一条红色带。如果存在该红色带表明阳性结果，反之则为阴性结果。混合物继续移动，到达固化的鸡抗蛋白A区（质控区），会在质控区生成一条红色带。质控区红色带的出现说明样本体积充足、液体流动适宜和作为对试剂的质控。

【保存方法】

   该密封袋或者瓶中含实验检测条应保存在20—28℃（室温）直至有效期。瓶中含捕获缓冲液也应保存在20—28℃。暴露在超过30℃温度下会影响实验性能，所以应尽量避免。检测条不应冰冻保存。从密封袋中取出后应在1小时内使用，避免受湿度影响。

【试剂盒组成成分】

• 检测条 25份

• 缓冲液一瓶

【储存条件】
检测条应保存在20~30℃（室温）直至有效期。Chase缓冲液也应保存在20~30℃。暴露在超过30℃温度下（多5天）会影响检测性能，所以应尽量避免。检测条不应冷冻保存，并且从密封袋中取出后应在0.5小时内使用，避免受湿度影响。

【样本要求】

• 该实验中应使用犬血清，不能使用全血样本。不能对样本进行稀释，

• 凝血后尽快离心分离血清，以避免溶血现象的产生。

• 应在采集血清后尽快进行实验。血清不能长时间存放在室温下。血清于2~8℃可保存3天，更长时间则应保存在-20℃以下。

• 实验前血清平衡至室温。冷冻的血清必须充分融解。避免反复冻融。

• 如果血清需要运输，其包装应该符合联邦的传染源运输法规。

【检测步骤】

• 实验前让血清平衡至室温

• 从密封袋或瓶中取出检测条

• 在检测条箭头下方加样区加入20ul的血清

• 在小试管中，或者96孔的组织培养板的微孔中加入2-3滴（150ul）的Chase缓冲液

将检测条插入小试管或者微孔中，根据检测条上的箭头，其末端应该朝下

• 在10分钟内读取结果。在读取结果前，背景的清晰度是十分重要的。尤其是当样本含低滴度的抗利什曼原虫抗体时，就只有一条很弱的色带出现在实验区（T）。10分钟后读取可能会导致错误结果

注意：不要只是加入Chase缓冲液进行实验。必须首先加入20ul的血清。

如果在加入捕获缓冲液后的10-15秒并没有观察到胶体金的移动，可轻轻压检测条上的样本加入区，直到观察到胶体金的移动。

【结果解释】

阳性结果

实验阳性则质控带（C）和实验带（T）均出现。一条微弱的色带也为阳性结果。作为解释指南，实验区的红色带的颜色强度与抗利什曼原虫抗体浓度相关。实验带为“弱阳性"血清样本，实验结果可能为弱阳性但可分辨的红色带，（“弱阳性"样本则含有对重组抗原低亲和力或者低滴度抗体）。

阴性结果

实验为阴性，则只有质控带出现。没有出现实验带

无效结果

质控带和检测带都没有出现结果，若只有检测带出现红色线，而质控带没有出现，则也为无效结果

建议使用新的检测条和新血清再次进行实验。

注意：实验区的红色带的变化是依赖于抗利什曼原虫抗体浓度。然而，该实验不能检测抗体的定量值和增加的百分比。

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