【微课堂】泰林压力蒸汽灭菌生物指示剂芽孢计数方法
时间：2024-03-22 阅读：1215
《药品GMP指南》生物指示剂的应用中指出，实验室在接收商品化生物指示剂时，应进行微生物数量测定。
那么压力蒸汽灭菌生物指示剂的总芽孢数是如何确定的呢？接下来为大家分享泰林压力蒸汽灭菌生物指示剂的芽孢计数方法（121℃灭菌生物指示剂均选用嗜热脂肪地芽孢杆菌 Geobacillus stearothermoρhilus ATCC7953）。
随机抽取需检验批次生物指示剂4片（支）与相关物品一并放入生物安全柜中，用酒精棉对指示剂初级包装进行擦拭，通风15min以上，后续操作如下：
注意：物料准备过程中，切勿使用紫外照射生物指示剂，可能会导致计数结果偏低。
将生物指示剂转移至生物安全柜内，取出载体，加入到含3~4颗4mm~6mm玻璃珠和3mL无菌水的试管中，置于涡旋混匀仪上充分振荡，将试管中载体打散成纤维状后，再加入7mL无菌水，制成均一的菌悬液，该试管记为10-1（同步平行4片）。
将悬液式生物指示剂（直管式，规格：0.3mL/支），用直管切割器打开置于含9.7mL无菌水的试管中，置于涡旋振荡仪上混匀，该试管记为10-1。
将上述10-1试管放置于95℃～100℃恒温水浴锅中热激活15min，热激活结束后立即放入 0℃～4℃冰水混合浴中迅速冷却至室温。
注：根据生物指示剂总芽孢数适当调整稀释级，建议最终稀释芽孢数在30~300cfu/mL。
总芽孢数cfu/片（支）=平均菌落数×稀释倍数
嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermoρhilus）ATCC7953菌落形态呈米黄色、表面光滑、不透明圆形，菌落生长状态良好，单一，无杂菌。总芽孢数结果应在产品标定值的50%～300%范围内。
★切勿将生物指示剂进行紫外照射消毒，建议对初级包装进行擦拭。
★应按2020年版《中国药典》要求，选择无菌水作为稀释液。
★吸取含纸质载体的菌液时，避免纤维堵枪头，导致移液不准确。
★建议以单片（支）生物指示剂的形式进行计数，确保每片（支）生物指示剂计数结果均符合要求。
★建议使用玻璃珠（4mm~6mm）对纸质载体进行打散处理。
★芽孢计数过程中必须进行热激活处理：温度95℃~100℃，时间15min