非洲猪瘟病毒核酸检测试剂盒（恒温可视法）
使用说明书
【产品说明】
本产品基于的恒温可视化检测技术，可针对血液、拭子样本、脾脏等组织样品中非洲猪瘟病毒的特异核酸片段进行
扩增，通过颜色变化判读结果。
【货 号】 YRMBV7301
【包装规格】 50 Tests/kit
【试剂盒组成】
【储存条件及有效期】
非洲猪瘟反应液 A 可 4℃保存 1 周，超过 1 周建议-20℃保存，并避免反复冻融 8 次以上。
样品前处理液、非洲猪瘟反应液 B、非洲猪瘟阴性对照、非洲猪瘟阳性对照和密封液可 4℃保存一个月，长期保存需要-20℃。
避光-20℃贮存，有效期均为 12 个月。（请于有效期内使用）
【适用仪器】
恒温孵育器（适配 PCR 管）。
【样品采集】
1． 抗凝血样品：用真空（EDTA 抗凝的真空）采集 5mL 血液，备用。
2． 血清样品：采集 5mL 血液样品，室温静置凝固后收集血清，备用。
3． 组织样品：脾脏，其次为扁桃体、淋巴结、肾脏、骨髓、肌肉等，剪取 10g 左右样品，装入无菌袋，备用。
4． 样品：采用商品化拭子采样管，棉拭子采集样品后，放入拭子保存管中，备用。
注：样本如不能马上检测，可短期冷藏（2-8℃）保存，如需运输要冷藏运输。长期保存需冷冻保存。
【检测步骤】
一、DNA 提取（样本制备区）
1、全血或血清样品。直接取 20μL 样本于 1.5mL 离心管中，加入 100μL 样品前处理液，混匀，100℃加热 5 分钟后，取出立
即 10000rpm 离心 1 分钟，上清即为样本模板。
★ 注意：对于全血样品，加热之后需立即离心，否则影响离心分离效果，*终影响结果的准确性。
2、新鲜组织样品（如脾脏等）。取 20mg 剪碎的组织样品于 1.5mL 离心管中，加入 100μL 生理盐水匀浆。取 20μL 匀浆后的
样本，加入 100μL 样品前处理液，混匀，100℃加热 5 分钟后，10000rpm 离心 1 分钟，上清即为样本模板。
3、拭子样品（如）。取 20μL 拭子保存液（或者拭子洗涤液）于 1.5mL 离心管中，加入 100μL 样品前处理液，混匀，
100℃加热 5 分钟后，5000rpm 离心 4 分钟或者 10000rpm 离心 1 分钟，上清即为样本模板。
试剂 规格及数量 存储条件
样品前处理液 1800 μL/管×3 4°C
非洲猪瘟反应液 A 50μL/管 -20°C
非洲猪瘟反应液 B 1100 μL/管 -20°C
非洲猪瘟阳性对照 100 μL/管 -20°C
非洲猪瘟阴性对照 100 μL/管 -20°C
密封液 1000 μL/管 -20°C第 2 页 共 2 页
★ 注意：样品前处理液使用时必须吹打均匀，否则影响提取效果。
二、试剂配制
N 个待检样品，则参照下表，按照 N+3 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对照，多配一个
反应确保反应液分装体积的准确），将反应液置于 1.5ml 离心管中，涡旋混匀或者盖上盖子上下颠倒混匀 10-20 次，离心 30
秒，每个 PCR 管分装 23μL，并向每管加入 1 滴密封液（约 20μl）。
试剂 使用量
非洲猪瘟反应液 A 1×(N+2)μL
非洲猪瘟反应液 B 22×(N+2)μL
反应液总体积 23×(N+2)μL
三、添加模板
向 PCR 管中分别加入 2μl 模板，顺序为阴性对照（阴性对照管可不加入模板）、待测样品模板、阳性对照。盖紧管盖，
离心 30 秒，立即进行扩增反应。
四、扩增反应（扩增及产物分析区）
恒温仪器 65℃条件下反应 40 min。
【结果判定】
在一个光线良好的环境（手机拍照开手电筒，效果更好）中观察反应液颜色（建议以白纸为背景）。如果溶液颜色仍为紫
色，则判定为非洲猪瘟病毒核酸阴性；如果溶液颜色变成天蓝色，则判定为非洲猪瘟病毒核酸阳性，结果如下。
★ 阴性对照反应管结果为“阴性”，阳性对照反应管结果为“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为
无效，请与技术支持人员联系。
【注意事项】
1、本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）一区：试剂准备区；2）第二区：样本制备区；第三区：模板添加区；第四区：扩增及产物分析区。
★ 分区之间*进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2、实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3、严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样步骤建议在冰盒上操作。如无冰盒，配好反应后，立即加入样品进行检测。
4、反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30 秒，并按检测
频次将反应液以适当体积分管保存。
5、★反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6、不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
7、试剂盒仅用于科研用途。
原创作者：厦门科朋仪器有限公司
