lx-2人肝星形细胞

一．细胞简介：

　　细胞名称：lx-2人肝星形细胞

　　平台编号:zl-056855

　　细胞介绍

　　该细胞系由发表该细胞文章的作者命名，这个细胞又叫LiemingXu-2，这是一个永生化的细胞。

　　细胞特性

　　1）来源：肝

　　2）形态：星状细胞，贴壁生长

　　3）含量：>1x106细胞数

　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　5)用途：仅供科研使用。

　　二．　lx-2人肝星形细胞细胞的培养：

　　1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

　　2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　三．　lx-2人肝星形细胞细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL*培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，*培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml*培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

　　3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

　　下面T25瓶为例；

　　1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

　　2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

　　3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

　　四、运输和保存

　　干冰运输及复苏好存活细胞

　　（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

　　五、细胞接收后的处理

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系质粒载体网。

　　2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的*培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后传代建议T25培养瓶1：2传代。

　　智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研发，生产，销售，售后为一体的*产业公司。拥有载体质粒，载体，国内外微生物菌种资源，感受态细胞，培养基，细胞株等广泛的生产销售线。

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　　提供各种类型载体宿主，基因种属类型，抗性，设计并构建质粒：大肠杆菌表达载体；哺乳动物表达载体；酵母表达载体；昆虫表达载体；植物表达载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24

　　pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9

　　pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及结合转移质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663

　　质粒菌种产品：

　　E.coliNissle1917；USA300：大肠杆菌JM108；希瓦氏菌属MR-1；E.coliW3110野生型；酿酒酵母W303a；酿酒酵母invsc1；酿酒酵母BY4741；酿酒酵母BY4742；毕赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢杆菌WB800；根癌农杆菌EHA105；根癌农杆菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐药鲍曼不动杆菌；哈维弧菌BB170

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　　提供模式菌种，科研菌种，普通菌种等菌种资源，有证质控样品等微生物标准品，芽孢悬液。常用药典菌种如：大肠埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501,铜绿假单胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus），类干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；灵芝，香菇，茯苓等

　　原代细胞和细胞系产品：

　　现取不同组织现分：不同来源人/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、前列腺、心脏、血管。常用原代细胞有：气管上皮细胞；前列腺上皮细胞；膀胱上皮细胞；输尿管上皮细胞；肾足细胞；内皮祖细胞；输卵管上皮细胞；乳腺上皮细胞

　　公司提供细胞系人源做过STR鉴定，其他做过种属鉴定，确保产品无误后方可提供客户，形式冻存或复苏节省客户时间；确保实验顺利。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞