纯化小技巧 | MaXtar® COLL 400/700病毒应用分享
时间：2024-05-30 阅读：221
百林科多模式层析填料家族中
有这么一类特殊的填料，凭借其独特的填料结构
发挥凝胶过滤和吸附层析的双重特性
专为超大分子设计。
包括MaXtar® COLL 400、MaXtar® COLL 700两种，分别适用于分子量超过400 KD和700 KD的超大分子。
MaXtar® COLL 400/700产品简介
独特的双层结构设计，外壳是多孔的钝化层 ，确保 400 KD或700 KD 以上的大分子不会进孔，直接走外水流穿；核心是偶联了同时具有疏水和吸附负电荷作用基团的球形内核，最大程度结合宿主蛋白、 核酸等杂质。具有明显优势：
• 以流穿模式处理400 KD 或700 KD 以上的大分子，工艺优化更容易，更方便线性放大。
• 改良的MaXtar® 基架具有更强刚性，因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速，提高工艺效率。
• 相比于传统的凝胶过滤层析，拥有更大的上样量，更高流速，生产效率大大提升。
• 耐受范围广，化学稳定性好。
• 适用于病毒及类病毒颗粒等生物大分子分离。
如何选择MaXtar® COLL 400/700
• MaXtar® COLL 400：如有病毒/大分子在MaXtar® COLL 700上收率不佳，有明显吸附现象，可尝试选择更小孔径的MaXtar® COLL 400进行优化。
• MaXtar® COLL 700：主要适用分子量大于700KD(约30nm)的病毒/大分子。
MaXtar® COLL 400/700应用案例分享
案例一：MaXtar® COLL 400在VLP的应用
图1：MaXtar® COLL 400纯化VLP图谱
样品：VLP(单体60kDa，120聚体)
柱体积：30ml
上样量：300ml
流速：7ml/min
表1：MaXtar® COLL 400纯化结果
小结：结合层析图谱和胶图可见，纯度有明显提高，杂质去除明显。
案例二：MaXtar® COLL 700在慢病毒中的应用
建议测试的工艺条件
样品信息：浓缩后样品
平衡Buffer：20 mM PB，150 mM NaCl ，pH 7.5或1×DPBS，pH 7.5
CIP Buffer：1 M NaOH，30%异丙醇
图2：MaXtar® COLL 700纯化慢病毒图谱
表2：MaXtar® COLL 700纯化结果
小结：回收率和杂质去除水平，均符合预期。
MaXtar® COLL 400/700应用过程中的Tips
◆ 为最大程度发挥COLL系列内部的多种配基吸杂效果，建议在缓冲液中添加100~150mM NaCl；
◆ 由于杂质与内部配基之间的高效多模式结合，需要对填料进行有效清洁，建议使用1M NaOH, 30%异丙醇。
◆ 不推荐使用柠檬酸盐缓冲液，因为柠檬酸离子会与配基相互作用。
百林科多种层析填料
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