纯化小技巧 | 抗体分离中的阳离子交换层析介质
时间：2024-05-23 阅读：895
在抗体纯化的经典三步法
亲和捕获+阳离子交换+阴离子交换中
早期已介绍过百林科阴离子交换层析介质
详见
今天，重点介绍一下百林科阳离子交换层析介质。
百林科阳离子交换层析介质丰富多样，依据基架类型，分为MaXtar® 基架和Chromstar® 基架，两者主要区别在于耐压，MaXtar® 基架通常可以耐受0.5MPa压力，Chromstar®基架可以耐受0.3MPa压力；根据配基的类型，可以分为SP(强阳)、S(强阳)、CM(弱阳)几种类型。
百林科MaXtar® 基架的
几种阳离子交换层析介质介绍
* 动态载量的测量条件：4.7 ml 预装柱，装柱高度：10 cm，在保留时间为5分钟时测量10% 穿透时的动态结合能力。测试缓冲液：50 mM 醋酸钠，pH 5.5(单克隆抗体)。
** 动态载量测量条件：装柱高度：10 cm，测试流速600 cm/h ，测试缓冲液：0.1 M 柠檬酸盐溶液，pH 3.0，测试样品：4 mg/ml 的 β- 乳球蛋白样品，当 β-乳球蛋白的穿透量达到10% 时，单位介质体积(ml) 的 β- 乳球蛋白上样量(mg)。
*** 动态载量测量条件：装柱高度：10 cm，测试流速150 cm/h ，测试缓冲液：0.2 M 磷酸钠溶液，pH 7.2，测试样品：4 mg/ml 溶菌酶样品，当溶菌酶的穿透量达到10% 时，单位介质体积(ml) 的溶菌酶上样量(mg)。
MaXtar® S HC作为百林科的明星产品，是一款高载量高分辨率的强阳离子交换层析介质，利用不同分子在特定条件下电荷性质和多少的差异对其进行分离。
在抗体的应用上有突出的高载量
采用CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)作为样品，对MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的DBC(动态结合载量)进行探索，发现：MaXtar® S HC的DBC明显优于MaXtar® SP HR，是其的2倍。实验条件如下：
层析柱：4.7 ml预装柱，装柱高度10 cm，柱体积约4.7 ml
样品：CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)
平衡缓冲液：50mM醋酸钠，pH5.5
洗脱缓冲液：50mM醋酸钠，1M氯化钠，pH5.5
保留时间：5 min
图1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR 10%
穿透(QB10)曲线
表1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR
在QB10的动态结合力
在抗体的应用上有突出的高回收率
依据单抗料液实际载量的80%进行上样洗脱测试，发现：MaXtar® S HC纯化后样品纯度达99.4%，收率为92.6%，HCP去除效果很好。实验条件如下：
层析柱：4.7 ml预装柱，装柱高度10 cm，柱体积约4.7 ml
样品：阴离子交换层析介质纯化后的单抗料液
平衡缓冲液：50mM醋酸钠，pH5.12
洗脱缓冲液：50mM醋酸钠，1M氯化钠，pH5.11，0~100%B 20CV
保留时间：5 min
图2. MaXtar® S HC的结合洗脱图谱
表2. MaXtar® S HC的纯化结果
MaXtar® S HC除去在抗体纯化上有优异得表现外，同样也适用于抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate，ADC)的精纯，详见【纯化小技巧 | 百林科助力ADC下游纯化的层析介质】。
百林科也希望在抗体、ADC及更多领域为客户提供完善的服务支持，助力各领域“通达无限可能”。
产品货号
订货信息
欢迎联系当地销售和技术人员。
百林科多种层析填料
均可申请试用，
扫描立刻申请样品
BioLink