纯化小技巧 | 抗体研究生产中的“好物分享”——层析介质篇
时间：2024-03-21 阅读：1240
随着抗体药的发展，
抗体的靶点
由单一靶向转向两个或者多个靶向
相对应的研究和生产工艺流程遇到的挑战也在升级
百林科多款重磅产品
在抗体应用领域表现亮眼
抗体生产工艺流程图：
表达量测定——ChromaX® A20
细胞收获之后，需要对细胞液进行精准定量。百林科ChromaX® A20是一款能够快速、准确测定细胞培养上清液中的抗体浓度(或滴度)而设计的Protein A亲和色谱分析柱，是以多孔结构的聚苯乙烯 - 二乙烯基苯(PS-DVB)微球为填充载体，重组 Protein A 为配基，通过特有的表面处理技术和偶联技术研制而成的。
ChromaX® A20 亲和色谱柱特点：
• 亲水 PS-DVB 基材，具有刚性好，反压低，传质快的特性。
• 独有的亲水处理技术，使非特异性吸附降至最低，确保抗体浓度测试结果的准确性。
• Protein A 特异性结合 IgG 的 Fc 区域，高选择性保证浓度测定结果的准确。
• 不锈钢柱体，可在 HPLC 上直接使用。
• 快速高效，2~5 min 内即可完成一次分析。
• 在抗体浓度 0.02~10 mg/mL 的宽范围内具有良好的线性。
• 采用耐碱 Protein A 配基，可以用 0.1 M NaOH 溶液对色谱柱进行再生。
ChromaX®A20良好的线性关系：
在单抗培养上清液较宽浓度范围内线性关系良好，高达0.9999
抗体分离纯化
抗体纯化主流工艺步骤主要包括Protein A 的捕获和两步精细纯化步骤，百林科提供相应解决方案如下：
(一)抗体捕获—MaXtar® ARPA
蛋白A亲和填料MaXtar® ARPA被广泛用于抗体纯化的捕获步骤。由于蛋白A通过Fc区特异性结合抗体，这一步可以显著减少过程相关杂质，包括宿主细胞蛋白和核酸。其自上市以来，在单抗、双抗和Fc融合蛋白均有较好应用，具有核心竞争力：
• 高耐碱的蛋白A配基，具有完全的自主知识产权。
• 高度交联的琼脂糖基架，且粒径均一。
• 稳定的批间一致性。
• 完善的法规支持文件RSF。
• 产能大，货期短，供应链稳定，性价比高。
MaXtar® ARPA 拥有
高载量、高流速、耐碱的特性：
高载量、高流速、耐碱的特性：
以Fc融合蛋白为例，在0.5M NaOH累计浸泡0h、12h、24h、48h后测试DBC10%动态结合载量。图1数据可见：0.5M NaOH浸泡48h后，MaXtar® ARPA的动态载量保持80%以上的初始载量水平。
图1：各阶段DBC数据
MaXtar® ARPA稳定的批间一致性
对比测试三个不同批次的填料A(进口品牌)和MaXtar® ARPA，图2和图3数据可见：3批次MaXtar® ARPA动态结合载量RSD仅2%，批间差异小于填料A；且MaXtar® ARPA回收率 RSD小于1%，批次间一致性较好。
图2：填料批次间DBC差异
图3：填料批次间回收率差异
(二)抗体精纯—MaXtar® MMA
MaXtar® MMA是一款多模式填料，常用于抗体纯化中的精纯阶段，可以去除聚集体、蛋白A配基、HCP、DNA 和病毒等多种杂质，且具有明显的性能优势：
• 改良的 MaXtar® 基架具有更强刚性，因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速，提高工艺效率。
• 高动态载量，一步结合大部分杂质，节约时间和成本。
• 耐受广泛的 pH 和电导率范围，有助于摸索最优工艺条件。
• 多用于挑战性样品的纯化，尤其对聚集体去除表现突出。
MaXtar® MMA流穿模式去除聚集体
使用双抗亲和收获样品，对MaXtar® MMA的除聚体能力进行研究，发现纯度由91.8%提升至99.5%，双抗的聚集体含量由 6.0% 下降到至 0.5%，聚集体去除效果明显。
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图5：MaXtar® MMA层析前后SEC-HPLC检测图谱
(左图为纯化层析前纯度占比91.8%，聚集体占比6.0%；
右图为层析后纯度占比99.6%，聚集体占比0.5%)
(左图为纯化层析前纯度占比91.8%，聚集体占比6.0%；
右图为层析后纯度占比99.6%，聚集体占比0.5%)
(三)抗体精纯—MaXtar® S HC
阳离子交换层析介质通常用在纯化中的精纯步骤，以去除HCP等痕量杂质。随着研发人员对产品纯化的高要求，使用者对填料提出了高载量和回收率，兼具高选择性价比的要求。在这种背景下，百林科通过不断努力创新，研发出具有高载量高分辨率的阳离子交换层析介质-- MaXtar® S HC。
MaXtar® S HC 拥有高载量特性：
采用CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)作为样品，对MaXtar® S HC的DBC(动态结合载量)进行探索，发现：MaXtar® S HC的DBC是常规阳离子的2倍。
表1. MaXtar® S HC在QB10的动态结合力
MaXtar® S HC 拥有高回收率的特性：
采用CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)作为样品进行测试，洗脱回收率可以达到97%以上。
表2. MaXtar® S HC的纯化结果
百林科多种层析填料
均可申请试用，
扫描立刻申请样品
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