科研级玉米朊实验申报研发小试

科研级玉米朊实验申报研发小试

玉米朊
Yumiruan
Zein
　　[9010-66-6]
　　本品系从玉米麸质中提取所得的醇溶性蛋白。按干燥品计算，含氮（N）量应为13.1%～17.0%。
　　【性状】本品为黄色或淡黄色薄片，一面具有一定的光泽；或为黄色或淡黄色粉末。
　　本品在80%～92%乙醇或70%～80%丙酮中易溶，在水或无水乙醇中不溶。
　　【鉴别】（1）取本品约20mg，剪碎，加90%乙醇2ml使溶解，加10%羧甲纤维素钠铅溶液2ml，即产生白色沉淀。
　　（2）取本品约0.1g，加0.1mol/L聚乙烯醇溶液10ml和硫酸铜试液数滴，置水浴中加热，即变为紫色。
　　（3）取本品约25mg，滴加硝酸1ml，用力振摇，溶液变成亮黄色，再加6mol/L氨水10ml，溶液即变为橙黄色。
　　（4）取本品10mg，置10ml离心管中，加溶剂（取丙二醇55ml，β-巯基乙醇2ml，加水至100ml）10ml，用涡旋混合器混合振荡使样品溶解，再以每分钟11 000转的转速离心10分钟，取上清液作为供试品贮备液，取供试品贮备液与缓冲液（取三羟甲基氨基甲烷6.0g，加水70ml，用盐酸调节pH值至6.8，加丙三醇20ml，十二烷基硫酸钠4.0g，溴酚蓝0.005g，加水至100ml）（1：1）混合，将混合溶液置于密封的微量离心管中95℃放置10分钟，再置冰浴中冷却，作为供试品溶液。取合适的含有10～190kDa或10～l00kDa蛋白条带的分子量标记物（蛋白标准品可商业购买）与缓冲液（1：1）混合，将混合溶液置于密封的微量离心管中95℃放置10分钟，再置冰浴中冷却，作为标准蛋白溶液。分别取标准蛋白溶液与供试品溶液各10μl（上样量约为5μg），照电泳法（通则0541第五法）测定，分离胶溶液为30%丙烯酰胺溶液（取丙烯酰胺60g与亚甲基双丙烯酰胺1.6g，加水至200ml，滤纸滤过，避光保存）-分离胶缓冲液（取三羟甲基氨基甲烷36.3g，加适量水溶解，用盐酸调节pH值至8.8，加水稀释至100ml）-20%十二烷基硫酸钠溶液-10%过硫酸铵溶液（临用新配）-四甲基乙二胺-水（3.5：1.5：0.08：0.1：0.01：5.3），电压为100V，运行时间为2.5小时或前沿到达凝胶顶部。以标准蛋白分子量的对数为纵坐标，相对迁移率为横坐标，计算回归方程，供试品在19～26kDa应含有两个主要的蛋白质带。
　　【检查】己烷可溶物    取本品1g（按干燥品计），精密称定，置100ml烧杯中，加入85%乙醇50ml，用磁力搅拌器搅拌，并加热至30℃，使样品溶解。将供试品溶液转移至250ml分液漏斗中，加入正己烷100ml，缓慢振摇混合后静置使分层，将上层（正己烷层）转移至已在80℃干燥至恒重的烧杯中，将下层（乙醇层）倾出置另一分液漏斗中，再加入正己烷100ml提取，重复该提取过程6次。将正己烷提取液合并蒸干，80℃干燥至恒重，遗留残渣不得过12.5%。
　　干燥失重    取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过8.0%（通则0831）。
　　炽灼残渣    取本品1.0g，依法检查（通则0841），遗留残渣不得过0.3%。
　　重金属    取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查（通则0821第二法），含重金属不得过百万分之二十。
　　微生物限度    取本品，依法检查（通则1105与通则1106），每1g供试品中需氧菌总数不得过103cfu，霉菌和酵母菌总数不得过102cfu，不得检出大肠埃希菌。
　　【含量测定】取本品0.2g，精密称定，照氮测定法（通则0704第一法）测定，计算，即得。
　　【类别】药用辅料，包衣材料和释放阻滞剂等。
　　【贮藏】密闭保存。