小鼠试剂盒操作回放

　　小鼠试剂盒操作操作步骤：

　　1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

　　4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

　　5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

　　6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD

　　值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标

　　准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释

　　倍数，即为样品的实际浓度。