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各种抗体的制备方法是什么?

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2024/12/24 14:07:08

    抗体是机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质,由浆细胞(效应B细胞)分泌。抗体可以分为多克隆抗血清、单克隆抗体和重组抗体,除了合成重组抗体外,几乎所有的抗体都来自于用免疫原对实验动物进行主动免疫。

一、多克隆抗体的制备:

①免疫方法:对多克隆抗体,免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮内免疫法、淋巴结免疫法和混合法等。一般来说,皮下或肌肉免疫法产生的抗体比较多;皮内免疫法所需的抗原量少,在抗原宝贵时特别适用,但与之相对的,它产生的抗体量也不多。混合免疫法的优点是抗原用量小,产生抗体速度快。

②多克隆抗体的制备:将抗原免疫动物(常用的动物为兔、羊、狗等),分离出抗血清并纯化抗体。多克隆抗体的均一性较差,其特异性相对较低,因此,多克隆抗体在农药残留速测技术中的应用受到一定的限制。但近年来有学者恰恰利用了多抗的交叉反应高的特点,通过制备出具有某类(或某几种)农药的“共性结构”的半抗原或者通过制备出含多个抗原决定簇的人工抗原来制备“宽谱特异性”抗体,进行农药多残留分析研究。

二、单克隆抗体的制备:

单克隆抗体制备技术最初是由K鰄ler和Milstein(1975)利用B淋巴细胞杂交瘤技术创立的。目前该技术已广泛应用于疾病诊断及生物、医学研究、环境和食品安全检测(监测)等方面。单抗均一性高,只和抗原某一决定簇结合,有更高的特异性,而且,产生抗体的单克隆细胞可在体外传代繁殖,不受动物免疫时间限制生产抗体。只要管理和培养技术正确,抗体就可无限的产生。基本过程是动物免疫、细胞融合、克隆筛选、单克隆抗体性质鉴定、腹水诱发、收集和纯化等。

三、重组抗体的制备:

近年来,随着蛋白质技术及DNA重组技术的发展,人们通过对抗体产生的基因本质、基因重组抗体筛选技术和直接定位诱导基因操纵技术的研究,获得用于zhi定空间位置并具有各种特异性、亲和性,能忍受一定温度、pH和有机溶剂的人工重组抗体。一般是将抗原免疫小鼠,一定时间后无菌条件下取出小鼠脾脏,提取脾细胞总RNA,以RNA逆转录合成的cDNA为模板,PCR扩增抗体,将抗体中的轻链、重链连接成ScFv(single-chainvariablefragment)。酶切经PCR扩增的ScFv片段,并与噬菌体载体连接,然后以常规方法转化入大肠杆菌或其他生物体中。人工培养带有噬菌体抗体的大肠杆菌,即得到重组抗体。该方法生产抗体速度快,可通过诱变改变抗体特性,使抗体的特异性更强,而且,利用这项技术获得的噬菌体抗体库,能同时识别多种农药,可用于农药多残留免疫速测技术的研究。

 

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