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纯化小技巧 | 抗体分离中的阳离子交换层析介质

百林科医药科技(上海)有限公司 >> 进入商铺

2024/5/23 10:07:07
 

 

在抗体纯化的经典三步法
 
亲和捕获+阳离子交换+阴离子交换
 
早期已介绍过百林科阴离子交换层析介质
 
详见
 
【纯化小技巧 | 抗体分离中的阴离子交换层析介质】

 

 
  今天,重点介绍一下百林科阳离子交换层析介质
 
  百林科阳离子交换层析介质丰富多样,依据基架类型,分为MaXtar® 基架和Chromstar® 基架,两者主要区别在于耐压,MaXtar® 基架通常可以耐受0.5MPa压力,Chromstar®基架可以耐受0.3MPa压力;根据配基的类型,可以分为SP(强阳)、S(强阳)、CM(弱阳)几种类型。

百林科MaXtar® 基架的 

几种阳离子交换层析介质介绍
 
  * 动态载量的测量条件:4.7 ml 预装柱,装柱高度:10 cm,在保留时间为5分钟时测量10% 穿透时的动态结合能力。测试缓冲液:50 mM 醋酸钠,pH 5.5(单克隆抗体)。
 
  ** 动态载量测量条件:装柱高度:10 cm,测试流速600 cm/h ,测试缓冲液:0.1 M 柠檬酸盐溶液,pH 3.0,测试样品:4 mg/ml 的 β- 乳球蛋白样品,当 β-乳球蛋白的穿透量达到10% 时,单位介质体积(ml) 的 β- 乳球蛋白上样量(mg)。
 
  *** 动态载量测量条件:装柱高度:10 cm,测试流速150 cm/h ,测试缓冲液:0.2 M 磷酸钠溶液,pH 7.2,测试样品:4 mg/ml 溶菌酶样品,当溶菌酶的穿透量达到10% 时,单位介质体积(ml) 的溶菌酶上样量(mg)。
 
  MaXtar® S HC作为百林科的明星产品,是一款高载量高分辨率的强阳离子交换层析介质,利用不同分子在特定条件下电荷性质和多少的差异对其进行分离。
 
  在抗体的应用上有突出的高载量  
 
  采用CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)作为样品,对MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的DBC(动态结合载量)进行探索,发现:MaXtar® S HC的DBC明显优于MaXtar® SP HR,是其的2倍。实验条件如下:
 
  层析柱:4.7 ml预装柱,装柱高度10 cm,柱体积约4.7 ml
 
  样品:CHO细胞表达的单克隆抗体(精纯后蛋白)
 
  平衡缓冲液:50mM醋酸钠,pH5.5
 
  洗脱缓冲液:50mM醋酸钠,1M氯化钠,pH5.5
 
  保留时间:5 min

图1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR 10%
穿透(QB10)曲线

表1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR
在QB10的动态结合力

 
  在抗体的应用上有突出的高回收率  
 
  依据单抗料液实际载量的80%进行上样洗脱测试,发现:MaXtar® S HC纯化后样品纯度达99.4%,收率为92.6%,HCP去除效果很好。实验条件如下:
 
  层析柱:4.7 ml预装柱,装柱高度10 cm,柱体积约4.7 ml
 
  样品:阴离子交换层析介质纯化后的单抗料液
 
  平衡缓冲液:50mM醋酸钠,pH5.12
 
  洗脱缓冲液:50mM醋酸钠,1M氯化钠,pH5.11,0~100%B 20CV
 
  保留时间:5 min

图2. MaXtar® S HC的结合洗脱图谱

表2. MaXtar® S HC的纯化结果

 
  MaXtar® S HC除去在抗体纯化上有优异得表现外,同样也适用于抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)的精纯,详见【纯化小技巧 | 百林科助力ADC下游纯化的层析介质】
 
  百林科也希望在抗体、ADC及更多领域为客户提供完善的服务支持,助力各领域“通达无限可能”。
 
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