技术文章

　　1．直接镜检和活菌计数
　　
　　（1）直接镜检采取患者呕吐物或剩余残食等为检样。将其用无菌生理盐水浸渍、稀释后制涂片，干燥，革兰染色、镜检。若有革兰阳性大杆菌[（4～5）um×1um左右l菌两端较平整，芽孢不大于菌体宽度，中生或稍偏端，运动，即为可疑菌。
　　
　　（2）活菌计数将残余食物以无菌生理盐水稀释成1：10，1：100，1：1000，…，分别用lml的灭菌吸管各吸取稀释液0．1ml作倾注培养，或接种于10％卵黄琼脂平板上，用灭菌的L形棒涂匀于平板表面，置37℃温箱培养12h后，取出计数。3-6h后该菌在卵黄琼脂平板上产生乳白色浑浊环，可和不产生乳白色浑浊的枯草杆菌等杂菌区别。
　　
　　2。分离培养
　　
　　将呕吐物直接划线或先把剩余残食等置灭菌乳钵中加适量无菌生理盐水研磨后，划线接种于普通平板或血平板，或10％卵黄琼脂平板上，置37~C培养18-24h后观察。如普通琼脂上生长呈乳白色，不透明，边缘不整齐常为扩散状，直径4～6mm的菌落，迎光观察似白蜡状，可疑为蜡样杆菌。血平板上，菌落为灰色不透明似毛玻璃状，其周围呈草绿色溶血。
　　
　　3。生化反应
　　
　　该菌分解葡萄糖、麦芽糖、糊精、蔗糖；不分解乳糖、鼠李糖、木糖、伯胶糖、甘露醇、肌醇、山梨醇及侧金盏花醇。吲哚阳性，甲基红阴性，V．P阳性，柠檬酸盐利用、卵磷脂酶、KCN均为阳性。在24L内液化明胶。H：S、脲酶阴性。酪蛋白酶、触酶阳性，溶血还原硝酸盐，溶血还原美蓝、石蕊牛乳迅速蛋白胨化。
　　
　　4．卵磷脂酶试验
　　
　　用铂耳取疑似蜡样芽孢杆菌的肉汤培养物点种于10％的卵黄琼脂平板上，该菌在其上有强烈的磷脂酶作用，生长迅速，于37~C培养3h后虽未见菌落但可看到因卵磷脂酶分解卵磷脂而呈乳白色浑浊环，称乳光反应。6h后此环可扩散至5-6mm。