BUNSEN本生带您解读：PCR实验耗材

　　什么是聚合酶链式反应?

　　聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)是一项用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它是在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析。

　　影响PCR实验的因素之一——耗材

　　在PCR实验中，影响扩增效果的因素有很多。我们能想到的有dNTP的质量与浓度、模板核酸的量与纯化程度、引物的设计、DNA聚合酶的浓度、扩增长度等问题。 实际上，使用的耗材也可能会影响实验结果，而这往往被我们所忽略。因此在选择实验耗材前，我们还需要了解PCR耗材相关的特性和术语。

　　如何选择合适的PCR耗材?

　　1、原材料

　　PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材质。

　　因其为生物学惰性材料，表面不易粘附生物分子，且有着良好的化学耐性，及温度耐受性 (可121℃高压灭菌，也可以承受热循环过程中的温度变化)。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触，因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。

　　2、选择合适的容积

　　PCR管的体积规格大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上，优先推荐选用低容管。因为低容反应管/板有着较小的上方空间，可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时，需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降，溢出及交叉污染，而加样过少可能会造成样品蒸发损失。

　　3、本生PCR管管盖的选择

　　平盖与凸盖各有优势：

　　平盖可为qPCR提供精确的荧光信号传递;便于书写标记;合盖容易，密封性好，易于操作。

　　凸盖与PCR仪热盖接触，减少压力引起的反应管变形，更好的防止液体蒸发。但会影响荧光信号传递，无法应用于qPCR实验。

　　4、96孔板裙边的选择

　　无裙边板：可适用于大多数的PCR仪或qPCR仪，但不适用于自动化、应用。移液过程中稳定性不高，需要配合板托使用。

　　半裙边板：可适配标签或应用条码，适合自动化应用，且有着较好的移液稳定性。

　　本生全裙边板：非常适用于自动化实验应用，也可适配标签及应用条码。机械强度较好，可适用于凸出模块的PCR仪，且移液过程中稳定性高。

　　5、根据实验选择耗材

　　根据检测方法的不同，耗材的选择也不同。PCR实验分为普通PCR法和荧光定量PCR法。普通PCR法一般是终点PCR跑胶法测定，所以所用耗材的导热性和密封性和实验结果有着密不可分的关系;而荧光定量PCR是实时检测荧光信号，除了导热性和密封性外，对透光性和避光性也有所要求。

　　荧光定量PCR耗材：

　　导热性：导热性越好越均一，PCR的速度就越快，准确度也越高。

　　密封性：密封性越好，产物的挥发越少，得到的产物就越多，同时气溶胶的产生也越少，对于下一轮实验的污染也就越少，也就意味着假阳性的产生率越低。

　　避光性：这是针对荧光定量而言的，如果我们在整个实验过程中没注意避光，带有荧光的试剂过度被消耗，那直接就会影响我们实验的扩增效率，导致产生不准确的结果。

　　透光性：这也是对于荧光定量而言，我们知道它是一种实时定量的方式，那么耗材本身的透光性就直接关系到我们检测到的荧光信号多少。如果选择耗材透光性良好，需要检测到的信号就会变得微弱，那就会造成我们对结果的误判。所以对于荧光定量而言，白色PCR板效果优于透明PCR板。

　　PCR实验耗材 本生公司产品种类已超过万种，正广泛应用于科研院校、中心实验室、分子生物学等科研域。公司丰富的产品既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。