小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽ELISA试剂盒说明书

　　一、产品概述

　　小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)ELISA试剂盒是用于定量检测小鼠血清、血浆或其他相关生物样品中小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽浓度的体外诊断试剂。本试剂盒基于酶联免疫吸附法(ELISA)原理，具有高灵敏度、高特异性和操作简便等特点，适用于科研实验、临床诊断以及药物研发等领域。

　　二、产品组成

　　1. 预包被PINP抗体的96孔板

　　2. PINP标准品(冻干粉)

　　3. PINP检测抗体

　　4. 辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗

　　5. 显色液A(TMB)

　　6. 显色液B(H₂O₂)

　　7. 终止液(2N H₂SO₄)

　　8. 浓缩洗涤液(20倍)

　　9. 样本稀释液

　　10. 酶标仪用覆盖膜

　　11. 试剂盒说明书

　　三、保存与运输

　　1. 试剂盒应储存于2-8℃避光环境中，有效期为XX个月。

　　2. 标准品、检测抗体、二抗和酶标板切勿反复冻融。

　　3. 运输过程中应保持试剂盒低温状态，避免阳光直射和剧烈震动。

　　四、检测原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法检测小鼠血清或血浆中的PINP。将PINP抗体包被于96孔板上，加入待测样本和标准品，样本中的PINP与包被抗体结合，再加入PINP检测抗体，形成抗体-PINP-抗体复合物，最后加入HRP标记的二抗，通过显色反应，利用酶标仪测定OD值，根据标准曲线计算待测样本中PINP的浓度。

　　五、操作步骤

　　1. 准备工作：提前30分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。用蒸馏水或去离子水将洗涤液稀释至工作浓度。

　　2. 标准品制备：用样本稀释液将PINP标准品稀释成不同浓度的标准品溶液。

　　3. 加样：分别将不同浓度的标准品溶液和待测样本加入孔板中，每孔100μL，设置空白对照孔，轻摇混匀。

　　4. 温育：用封板膜封板后，置37℃温育30分钟。

　　5. 洗涤：揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。

　　7. 温育：再次用封板膜封板后，置37℃温育30分钟。

　　8. 洗涤：重复步骤5的洗涤操作。

　　9. 显色：每孔先加入显色液A 50μL，再加入显色液B 50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

　　10. 终止：每孔加终止液50μL，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　六、结果计算与判断

　　1. 根据标准品OD值和对应浓度绘制标准曲线，计算出标准曲线的回归方程。

　　2. 将待测样本的OD值代入回归方程，计算出待测样本中PINP的浓度。

　　3. 结果判断：根据正常参考值范围，判断待测样本中小鼠PINP的水平是否正常。

　　七、注意事项

　　1. 严格按照操作步骤进行，避免交叉污染。

　　2. 洗涤过程中要充分拍干孔板，避免残留洗涤液影响实验结果。

　　3. 显色反应时间应严格控制，避免显色时间过长或过短导致结果不准确。

　　4. 若样本浓度超出线性范围，需适当稀释后重新测定。

　　5. 试剂盒为一次性使用产品，不可重复使用。

　　八、临床意义

　　小鼠Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)是骨形成过程中的重要标志物之一，其浓度的变化可反映骨代谢的状态。因此，通过检测小鼠血清或血浆中的PINP浓度，可评估小鼠的骨代谢状况，为骨质疏松、骨折等疾病的诊断、治疗和预防提供重要依据。

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