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高速离心机别离的几种办法

时间:2023-02-10      阅读:95

 制备型超高速离心机的几种别离办法:

  A.差速离心:逐次添加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。

  差速离心是一种的办法。在这种办法中,离心机管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在必定速度下必定时刻的离心后,就可得到两个部份:沉积和上清液。

  通常在次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉。这时所需的组份大部分仍留在上清液中。然后将收集到的上清液以更高速度离心,把所需的粒子沉积下来。离心的时刻要挑选得当,使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。对于得到的沉积和上清液能够进行进一步的离心,直抵达到所需要的别离纯度为止。

  差速离心的特点是操作简单,但别离纯度不高。

  B.密度梯度离心法:能够同时使样品中几个或全部组份别离,具有很好的分辨率。

  1)速率区带法(rate zonal):

  依据样品中不同粒子所具有的不同的尺寸巨细及沉降速度(S)。大致步骤如下:

  在离心管中装入密度梯度溶液,溶液的密度从离心管顶部至底部逐步添加(正梯度)。

  将所需别离的样品小心肠加至密度梯度溶液的顶部。样品在梯度溶液外表构成一负梯度。

  由于不同巨细的粒子在离心力效果下,在梯度中移动的速度不一样,所以经过离心后会构成几条分隔的样品区带。

  留意:样品粒子的密度必须大于梯度液注中任一点的密度。离心过程必须在区带抵达管子底部前中止。

  2)等密度离心法(isopycnic):

  依据粒子的不同密度来别离。离心机使用过程中,粒子会移至与它自身密度相同的地方构成区带。

  密度样度的挑选要使梯度的范围包含所有待别离粒子的密度。样品能够在密度梯度液粒上面或均匀分布在密度梯度中。经离心后,样品粒子达到它们的平衡点。留意:平衡后粒子的别离由其密度决定,与时刻无关,此时再改动离心转速,只能改动区带的相对方位。

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