常用的免疫组化染色方法很多，有直接法和间接法。直接法是将酶或荧光素等标记在第一抗体上，然后用该被标记的第一抗体与组织细胞中的抗原结合，即可以显色或在荧光显微镜下观察结果；

间接法是将标记物标记在第二抗体或第三抗体（复合物）上，其方法是先将特异性的第一抗体与组织细胞中相应的抗原结合，再将被标记上标记物的第二抗体与第一抗体结合，最后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。

如果标记物是标记在第三抗体（复合物）上，则第二抗体与第一抗体结合后，再用被标记上标记物的第三抗体（复合物）与第二抗体结合，最后用显色剂显色或在荧光显微镜下观察结果。

01  ABC 法  

卵白素-生物素复合物（avidin biotin complex，ABC）法属于亲和免疫组织化学技术，该方法是根据卵白素和生物素具有高度亲和力的生物学特性，用生物素与过氧化物酶结合获得生物素化过氧化物酶，生物素化过氧化物酶再和加入的卵白素形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物即ABC复合物。

ABC法为三步法，第二抗体为生物素化的IgG，其中的Fab片段和第一抗体结合，生物素和ABC复合物中的卵白素结合，最后通过ABC复合物上的过氧化物酶参与显色反应而形成有颜色的不溶性沉淀物。由于卵白素和生物素的亲和力很强，所以ABC法较敏感，比PAP法敏感20～40倍。

   

02  LSAB（S-P) 法 

标记抗生物素蛋白链菌素-生物素（lablled streptavidinbiotin）法和ABC法相似，不同处是在第二抗体之后ABC法用ABC复合物而LSAB法用标记了过氧化物酶的抗生物素蛋白链菌素（streptavidin，SA）。SA是从链霉菌属蛋白分离出来的一种蛋白质，它仅标记了过氧化物酶而本身没有与生物素连接，生物素是连接在第二抗体上。

由于SA分子量较小，ABC复合物分子量大，因而SA穿透组织的能力比ABC复合物大，反应速度快。SA有两个和生物素亲和力*的结合点，其本身没有连结生物素，可以与第二抗体上的生物素连结。这样，SA比ABC复合物更容易与第二抗体上的生物素结合，因而SA的敏感性比ABC高，反应所需的时间比ABC短。

如在实验中遇到困难，也可以选择Leica全自动免疫组化染色仪来协助您。

下期预告

酶标聚合物（labelled dextran polymer，LDP）法

增强聚合物一步（enhanced polymer one setp，EPOS）法

催化信号放大（catlyzed signal amplification，CSA）法

抗生物素蛋白链菌素-生物素复合物（streptavidin biotincomplex，SABC）法