利用无菌隔离器进行无菌操作之前，隔离器系统的验证必须完成。为了核实隔离器及其辅助设备能够用于进行无菌操作，隔离器系统的验证可以分成三个部分：安装验证、性能验证、操作验证。在进行无菌隔离器系统验证过程中，应当考虑到下面的观点。在验证程序的特定阶段（例如 IQ、OQ、PQ），各个阶段试验的任务是不被确定的，在隔离器用于确定的检测前，隔离器的功能应当被验证并且有文字记录。

        1、安装确认IQ

        IQ 阶段包括隔离器系统详细的外观描述，例如隔离器尺寸、内部结构、所用的材料。关于接触面和传递系统，要清晰的画图并标注尺寸。设计的隔离器是否符合使用的规格需要被核实，例如空气补给、真空、外部排气、温湿度控制等。其他与隔离器系统一起使用的设备也要详细描述；任何设计规格的修订都应当详细描述。设备指南和复印件应当编成目录并保存，在需要的时候，操作者可以得到并重新查阅。一旦设计规格符合性被核实，所有的图纸、方法和设备图要编成目录，保存并能够重新得到。

        所有的文档应重新被审阅， 便于核实能够反映出安装系统的关键属性要求。这样就建立了符合隔离器系统设计规格和安装要求通用的基准。在故障模式下或高风险情况下进行分析时， 可能导致试验失败的潜在的过程控制问题和设备问题可能被发现，这些问题应当进行鉴定并记录在文档中。如果必要，系统可以被修改，以便将失败的风险降到低点，并且关键点的控制方法被建立。安装确认的结果被总结成为一个安装确认报告，建议包括下列文档：

• 设备：设备应符合设计规格并被列表记录。 IQ 报告应核实：符合设

计规格的设备被接收，并且按照生产厂商的要求进行安装。

• 结构材质：隔离器系统关键部位的结构材质经检测是符合设计要求的。

对隔离器材质的杀菌方法兼容性应当被核实。

• 仪表：仪表被核实符合其精度要求并列表。
• 功能规格：所有操作功能，例如在操作手册、流程、仪器图表中指明

的功能，都应当被核实能够执行并且符合规格要求。隔离器系统和其他系统的所有连接部分应进行审核，其功能应被核实符合设计要求。

• 过滤器证明：HEPA 过滤器和微生物截留过滤器的测试和证书；测试结

果和证书复印件应包括在 IQ 报告中。核对采购合同，核实空气过滤系统符合规格要求。

• 计算机软件：所有的和隔离器系统有关系的计算机软件列出名称、规格、

文档编号。计算机系统盘被检查贴签并安全保存。

      2、操作验证OQ

      OQ阶段核实隔离器系统的操作能够符合说明书的功能。

• 操作性能检查：这个试验核实所有的警报和警报的功能符合说明书要求。

系统所有设置点和可调整的参数都应当被核实符合规定的要求。

• 隔离器完整性检测：在通常的操作条件下，隔离器应保持完整性。在隔

离器载物并使用化学杀菌剂灭菌前，一个泄露试验可以证明隔离器符合厂家说明书要求并且是安全的。 为了避免外界污染， 隔离器通常在 20-80Pa正压下进行操作。如果隔离器系统要求一个恒定的正压，验证过程中必须核实操作时的压力设置值能够维持并且可以控制。

• 灭菌周期确认：执行一个无菌周期，以便核实操作的实际数值与无菌期的各个步骤情况以及设置数值一致。可以采用几种不同的灭菌方法来除去隔离器和辅助系统的微生物。 可以用于隔离器灭菌的化学试剂包括过氧乙酸、二氧化氯、臭氧、过氧化氢，不同的试剂有不同的暴露条件和过程控制。选定的灭菌方法应符合厂家的操作要求，并且在实用规程中对这些方法进行描述是十分关键的。使用过氧化氢蒸汽灭菌时，隔离器房间的温度和湿度的控制是关键的。隔离器内部的温度也是重要的，尤其在使用过氧化氢蒸汽灭菌过程中的影响是非常重要的，关键在于保持过氧化氢的浓度，避免低于过氧化氢的冷凝点。一些化学试剂，例如二氧化氯和臭氧，要求在灭菌前预先增加隔离器的湿度。如果采用对湿度有较高的要求的灭菌方法时，在 OQ中，控制湿度的能力必须被核实。

        灭菌剂的浓度和浓度分布情况也是重要的。 当灭菌剂以气态或蒸汽状态存在时，它的浓度可以通过化学指示剂、光谱方法或电极检测。灭菌剂分布情况也可以使用化学指示剂测量（注意：化学指示剂仅能够提供定性的而不是定量的信息）。

        采用灭菌剂在气态或蒸汽的状态下进行灭菌时，要求隔离器内部使用风机来均匀分布灭菌剂。风机的位置和方向可以进行调节以保证适宜的气流分布。由于架子、设备、手套、袖子装置和半身衣，能够影响气流分配模式，必须对隔离器满载状态下的气流分布进行检测，物品的摆放情况进行详细描述并以文件形式记录。有时使用更小的传递隔离器作为便携式表面灭菌单元， 待验物品和辅助用具通过传递仓进入隔离器之前，这些物品和用具在便携式表面隔离器中进行化学灭菌。在 OQ过程中，应制定出便携式表面灭菌器中物品和用具的摆放情况，审核摆放图并记录在 OQ上。（注意：化学灭菌剂作用在设备表面，因此，一些被遮盖的设备表面能够残留微生物并存活） 。达到杀菌剂作用时间后，可以使用通过除菌装置的新鲜空气或其他方式处理过的新鲜空气将杀菌剂从隔离器中移走。通过一个向外开放的通道，气体通过排风口排入大气；或者通过一个密闭的通道，在通道中使用一个杀菌装置移走并消除灭菌剂。如果使用一个向外开放的排风通道，排放系统的气流和安全性应当被检测。

• 灭菌周期的研究 ：当 OQ完成后，进行灭菌周期的研究以便建立日

常灭菌控制过程必要的参数。一些普遍使用在工业中的无菌工艺验证的方法是可行的，例如生物负荷量和过度杀灭。灭菌工艺进行生物指示剂挑战试验。生物指示剂的孢子数和耐热性是已知的。无论如何，应该得到生物指示剂真实的 D 值；（看生物指示剂 --- 耐热性能试验《 55》）；从生物指示剂供应商处获得 D 值是可以接受的。如果不可能获得准确的 D 值，同时无法证明灭菌剂浓度的有效性，可以使用半个周期（循环）的方法对整个周期（循环）进行确认。

        3、性能验证PQ

        PQ是核实隔离器系统的功能是符合操作者的要求。 PQ过程完成后，灭菌周期是适合的，排出口的灭菌剂被检测是适合的，所有的 PQ过程的数据应该被统计，分析，存档。

• 清洗确认：在通常情况下，对于有些无菌操作来说，清洁不是关键的，

但是，残留的产品可能会对检验有影响，有杀菌效果产品的残留对检验结果的影响尤其显著，在检测低水平污染时，这些残留的物质会对检测产生影响。由于粉末容易扩散，杀菌性粉末产品的残留对检验结果的影响是重要的。对于无菌检验隔离器系统和操作者的要求来说，没有肉眼可见污染这种清洗水平是合适的。清洗方法、周期、设备、清洗隔离器中所用的材料记录在文件中。

• 无菌验证：隔离器内表面、隔离器内的设备、拿进隔离器的各种物料都

应当去除微生物。隔离器表面、无菌检验设备、检验物品的灭菌和产品接触部位或者产品药物成分接触部位的灭菌是不同的。隔离器灭菌可以用过度灭菌的 log 降低值来评估实现。如果超过灭菌周期，无菌保证水平不再被确定。隔离器灭菌操作完成之后，通过空气过滤系统的维持，好的物品传递技术的采用，更重要的是：经过无菌处理的隔离器手套完整性的保持，隔离器的无菌性被保证。

    通过阴性分数法或者过度杀灭法可以证实，用于隔离器、试验物品、无菌检验用设备的灭菌方法可以使某种合适的、高抗性的生物指示剂的微生物数下降 6 个 log 降。（看用于灭菌的生物指示剂《 1035》）。过度杀灭分析法适用于每单位 104孢子数的生物指示剂，而阴性分数法适用于每单位孢子数大于等于 105的生物指示剂。使用足够数量的生物指示剂进行试验可以从统计学上证明灭菌效果是可以再现的以及灭菌剂的分布是合适的。隔离器内设备和物品满载时，需要用更多的指示剂进行试验。因此，没有一个或者更多的足够量的传感器来测量杀菌剂的浓度时，增加生物指示剂的放置是可以考虑的。在连续三次灭菌试验中，六个 log 降的杀菌能力是证明可以灭菌的。操作者建立隔离器再次灭菌的周期。这个周期可以是短短的几天，也可以是几周的时间，建立的依据是无菌保持能力（看隔离器内部环境无菌保持）

• 隔离器内部环境的无菌保持：在一个无菌周期内， 隔离器系统保持内

部环境无菌的能力必须被验证。隔离器系统出现故障或者隔离器内部的偶然污染情况下的微生物必须被检测。微生物检测通常包括一个例行的取样程序，它可以包括，例如，灭菌后的天和无菌保持期的zui后一天。放置在隔离器中的培养基被证明是无菌的。隔离器内部可以使用平面接触双碟或者棉签搽拭监控。然而，因为培养基残留会使隔离器产生染菌的风险，因此，在检验完成后进行检测。如果试验中有培养基残留，细心地从隔离器内部清理干净。空气取样和培养基检测双碟可以使用，但它们在检测隔离器内部非常低水平的污染时不是很灵敏。zui可能污染的途径是检验用具和样品进入隔离器的过程。验证所有进入隔离器内部的物品是无菌的这一点是关键的，也应当定期检查垫圈，确保其完整，避免微生物的进入。手套和半身衣是另一个可能产生污染的来源。因为操作者戴着手套处理无菌检验物品，所以手套是应当特别关注的，手套上微小的破损很难检查出来，手套在使用时，在拉伸情况下，手套上微小的破损可以体现出来（注意：培养基接触法检测手指菌落的方法，在检测低水平的污染时灵敏度是不足的。用 0.1%的蛋白胨水溶液浸泡手套，将溶液过滤，然后将滤膜放在生长培养基碟子上检测，这个方法可以检测出其他方法检测不出的泄露。）

        隔离器内部进行连续的尘埃粒子检测是理想的，这样可以快速检测到过滤器的泄露。 第二个选择是使用便携式的尘埃粒子检测器进行周期检测。尘埃粒子检测取样不能对隔离器内部的无菌环境产生风险。

• 无菌检验结果的解释：如果人员没有直接接触工作区，验证过的传输通

道没有破损，隔离器内部微生物被去除并有一个高的无菌保证水平，那么，无菌检验中的假阳性是很难出现的。然而，隔离器是一种机械装置，好的无菌操作技术仍然是必须的。只有充分地符合“无菌检验检测和调查《 71》的情况下，才能下阳性结果无效这个结论。

• 培训和安全：因为无菌检验操作在洁净室进行，操作者针对隔离器专门

程序进行培训。所有的培训记录和操作者操作的评估应有一个单独的记录并且存档。对所有进行操作或者维护隔离器的人员进行必要的安全培训是必须的。人员使用杀菌剂的安全性必须被评估。 使用杀菌剂的直接区原材料的安全数据或者一个类似安全数据文件是必要的。贮藏和安全方面的预防措施应当符合规定。在隔离器使用之前，隔离器和所有连接的通道安全检查应当被执行。