4Cell® NutriVero™Flex 10 培养基系统优势

本产品为化学成分限定的无血清、无动物源成分培养基,其是由赛多利斯与致力于转化疫苗学的研发机构Intravacc联合开

发,其将为您提供一致的细胞培养结果,并帮助您对病毒生产工艺进行更大限度的控制:

■ 生产效率:化学限定的高速细胞生长和高病毒滴度

■ 操作效率:简化下游纯化和过滤工艺，同时提高病毒生产能力

■ 安全且满足监管要求:降低工艺差异和污染风险，以达到最佳安全性

4Cell® NutriVero™Flex 10 培养基系统产品信息

新开发的4Cell® NutriVero™Flex 10是一种化学成分限定的无血清、无动物源成分培养基,主要用于支持Vero细胞在2D贴壁培养和3D微载体悬浮培养系统中的生长，并针对病毒的生产进行了优化。

化学成分限定的4Cell® NutriVero™Flex 10是-一种稳定的培养基,只含重组成分,不含任何植物提取物(水解物),因此其可以提供一致的细胞培养结果。

应用

Vero细胞系是日本的Yasumura和Kawakita在1962年从非洲绿猴的肾脏中分离出来的,可用于不同用途，其中最重要的一个用途就是基于细胞培养生产病毒疫苗。Vero细胞系因其病毒产量高且稳定而得到广泛使用,并且相对来说易于驯化,以在生物反应器中的微载体上生长，这样就可以获得更高的疫苗纯度和数量。

标准产品特征

针对在贴壁2D单层细胞(图1A)和3D微载体微珠(图1B)Vero细胞生长验证4CellONutriVero"Flex 10培养基的性能。在两个系统中，4Cell@NutriVero"Flex 10培养基显示与含有未限定提取物(水解物)的对照培养基性能相当。

图1A.4Cell®NutriVero™Flex 10在Vero Cell 2D培养系统中的性能。

将Vero细胞以40000个细胞/cm2的细胞密度接种在T25摇瓶中，并在37°C、潮湿环境和5%CO2的条件下于4Cell®nutrio Vero™Flex 10培养基或参比对照基培养。

图1B.3D培养系统中的Vero细胞生长密度

使用化学成分限定的4Cell® NutriVero™ Flex 10培养基和非化学限定对照培养基将两个并列的生物反应器填充到2L的工作体积搅拌速度设定在70-130rpm之间，温度设定为37°C，pH值控制在7.2。在生物反应器中接种 0.15 x 109 个细胞/L的细胞以及3g/L的微载体。

通过计算TCID50（50%组织培养感染剂量）指数进行病毒定量。与含有未限定提取物（水解物）的对照培养基相比，4Cell®NutriVero™Flex 10培养基在支持2D单层细胞中Vero感染和病毒生产力（图2A）以及在微载体珠粒中悬浮（图2B）方面显示出较高的性能。

图2A.对限定的4Cell®NutriVero™Flex 10培养基病毒生产能力进行初步评估。

将Vero细胞培养物以30000个细胞/cm2的细胞密度接种在6孔板上，而且该培养物感染了各种病毒：麻疹、萨宾脊髓灰质炎1型病毒和 EV71-C4。7天后，培养物显示CPE阳性，收集了上清液被并通过病毒滴定程序对感染颗粒的数量进行了分析。

图2B.3D微载体培养系统中的肠道病毒71-C4的病毒生产

在1L生物反应器中将Vero细胞以0.12 ± 0.03 x 106个细胞/ml 的浓度培养3天，浓度达到0.9 ± 0.2 x 106 个细胞/ml。接种66小时后，以7.55log10TCID50/ml的滴度感染EV71-C4细胞。感染后在规定的时间点取样，并分析病毒滴度。