玩转病毒载体生产：Hydrosart超滤膜包的应用秘籍
时间：2024-02-02 阅读：674
病毒载体被广泛应用于基因治疗、疫苗或溶瘤病毒治疗癌症等领域。腺病毒是常用的病毒载体之一，尤其适用于疫苗应用。使用悬浮哺乳动物细胞可以高效地生产腺病毒。细胞培养结束后，需要进行细胞裂解步骤以释放AAV，同时也会释放 HCP 和 DNA 等许多杂质。在澄清去除细胞碎片后，腺病毒悬浮液需要先进行浓缩和洗滤换液，然后再进行第一步层析纯化。正确选择超滤膜包和超滤(TFF)系统可确保病毒的最高回收率。浓缩和洗滤换液(DF) 阶段也有助于产品纯化，并方便后续的下游处理步骤。本文主要介绍超滤浓缩和洗滤换液步骤中，Sartorius的Hydrosart超滤膜包的应用数据，供大家参考。
原有工艺优化案例一
原超滤工艺：300KD聚醚砜材质膜包，病毒回收率仅为10%
工艺改进推荐：Hydrosart稳定化纤维素膜包
物料类型和测试产品：
测试结果：
鉴于Hydrosart膜包在其他项目中的良好表现，第一次测试采用300KD的Hydrosart膜包进行测试，过程中未发生明显的堵膜情况，滤出通量比较平稳，见图1。病毒产品回收率由原来的10%上升到47.82%，明显优于原有聚醚砜材质膜包的回收率。
图1 Hydrosart 300KD膜包超滤测试-AAV
但是第一次测试回收率并不高，而且在下游透过端检测到有病毒泄露，因此采用100KD Hydrosart膜包进行了第二次测试，洗滤换液阶段滤速平稳，见图2。病毒回收率达到113.22%。
图2 Hydrosart 100KD膜包超滤测试-AAV
由上面的结果我们可以得出，Hydrosart 100KD膜包用于澄清后AAV病毒原液超滤浓缩和洗滤换液，可以实现很高的回收率和较高的滤出流速，处理过程中滤速平稳，使用后膜包的水通量恢复率很好。
原有工艺优化案例二
原超滤工艺：100KD聚醚砜材质中空纤维，滤出速度较低，换液效率低，放大后与系统匹配难度大
工艺改进推荐：100KD Hydrosart稳定化纤维素膜包
物料类型和测试产品：
测试结果：
第一次测试时，洗滤3倍后料液逐渐开始呈现乳白色现象，主要是缓冲液pH较低，在过程中出现杂蛋白沉淀。产生的沉淀堵塞膜包，导致膜包的滤速明显下降，见图3。针对该物料，根据实际情况，与客户沟通工艺步骤和缓冲液配比，再进行重复测试，总回收率72.97%。
图3
捕获层析后的物料，采用Hydrosart 100KD膜包进行超滤测试，少量浓缩后洗滤6倍，样品pH和电导达到上样要求，具体超滤参数见图4，产品回收率提高到89.49%。
图4
Hydrosart是稳定化再生纤维素材质，材质本身具有天然的亲水性能，超低吸附；是纤维素经过化学修饰改造而得的膜材，除了保留纤维素本身的亲水性外，其化学兼容性更强。只需常规的CIP程序(如碱清洗)即可获得很好的水通量恢复率，现已广泛应用于多种血清型的AAV超滤生产。
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赛多利斯Hydrosart®超滤膜包
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