无论是原代培养还是细胞系的传代培养，一旦培养开始，就要定期更换或补充细胞培养基。如果细胞持续增殖，随后迟早要进行传代培养。对干不增殖的培养物，也需要定期更换培养基，因为细胞仍会代谢，培养基的某些成分会耗尽或自然降解，产生的代谢废物也需要通过换液去除。

　　

　　细胞传代间隔在不同细胞系中因生长速率和新陈代谢的不同而不同。快速生长的转化细胞系，如HeLa细胞系，通常每周传代一次，四天后换液。生长缓慢的细胞系，特别是非转化的细胞系，可能每两周、三周甚至四周传代一次，两次传代之间每周换液。

　　

　　有四个指标表示需要更换细胞培养基：

　　

　　一、pH降低时

　　

　　pH降低，要考虑pH降低的速率和确切值。当pH从7.0降至6.5，大多数细胞停止生长；在pH6.5和6.0之间，细胞开始失去活性。如果细胞培养基从红色变成橙色，再变成黄色，那么需要更换细胞培养基。尽量估计pH降低的速率；如果pH为7.0的培养物每天降低0.1pH单位，那么在换液前多放置一两天没什么伤害，但若培养物每天降低0.4pH单位，则需在24～48h内换液，不可不换液而放置过周末。

　　

　　二、细胞浓度

　　

　　细胞浓度，细胞以高浓度培养比以低浓度培养更快地消耗细胞培养基，pH变化速率能够证明这一点。但也不总是如此，部分代谢较快的细胞密度低时也很容易使细胞培养基很快变黄，也有代谢慢的细胞密度非常高了可能才会变黄。

　　

　　三、细胞类型

　　

　　细胞类型，正常细胞（例如二倍体成纤维细胞）通常在高密度时停止分裂，这一现象是由于细胞拥挤，生长因子耗尽及其他一些因素造成的。细胞停滞在细胞周期的G1期，即使放置2～3周甚至更长时间，细胞也很少变性。然而，转化细胞、连续细胞系以及一些胚胎细胞在细胞密度过高时迅速变性，除非每天换液或传代。

　　

　　四、形态衰退

　　

　　形态衰退，这点需通过定期观察和熟悉细胞系来预计。如果任其退化发展下去，它将成为不可逆的，细胞将会进入凋亡。