一、所用培养基/液：LB培养液，TSB培养液，FT培养液，麦康凯培养基，TSC培养基，TSA培养基等。

二、 冻干保护剂：10%脱脂奶粉，5%蔗糖，1%明胶，溶于纯水中。

三、 其他试剂：小牛血清，NAD，环丝氨酸等。

四、 常见细菌：大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、鸭疫里默氏杆菌、副猪嗜血杆菌等。

五、 操作步骤：

1. 所用培养基及冻干保护剂均高压灭菌；

2. 取分离所得细菌菌液或甘油保存的细菌一环，在培养板上分区或蛇形划板（大肠杆菌在麦康凯平板上划板），37℃倒置培养过夜；

3. 取一只干净的试管，倒入约10mL培养液（大肠杆菌用LB培养液），从培养过夜的平板中挑取一个单菌落于该培养液中，37℃振荡培养过夜；

4. 取10个干净的西林瓶，每瓶加入1mL冻干保护剂，再加入1mL培养过夜的菌液，盖上橡胶塞，留出气孔，标记好之后放入-80℃冰箱使其冷冻；

5. 细菌冻干机预热约30min，迅速将已冷冻的菌液放于细菌冻干机上，一般十几小时之后细菌已冻干，关闭冻干机，取出已冻干的细菌，压盖，放于-80℃超低温冰箱保存，可达十年之久。