GelGreen 核酸染料（500μL in water, 10,000 X）

  GelGreen是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有*设计的荧光染料。在游离状态下，GelGreen发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，GelGreen的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。GelGreen与 EB 有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置。标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，使用与观察 EB 相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在 300 nm 紫外光附近可得到*激发。GelGreen的zui大吸收波长约为518 nm，发射波长zui大约为605 nm。GelGreen 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。另外，GelGreen与EB相比，诱变能力大大降低。

GelGreenzui初由美国Biotium公司研发，艾姆斯试验表明，这种新型染料细胞透过性、诱变性方面表现优异，得到市场广泛认可。

GelGreen 核酸染料（500μL in water）运输与保存方法

常温运输、保存，保质期24个月。

GelGreen 核酸染料（500μL in water）使用方法

1．胶染法（用法同EB）

      （1）制胶时加入GelGreen核酸染料（例如：每50mL琼脂糖溶液中加入5μL GelGreen 10,000×储液，以此比例类推）。

      （2）按照常规方法进行电泳。

GelGreen 核酸染料（500μL in water）注意事项：

此方法染色染料用量相对较少，500 μL染料大约可以做100块50 mL的胶。由于GelGreen具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将GelGreen储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。GelGreen兼容所有常用的电泳缓冲溶液。含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并*保存直到使用。此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

2．泡染法

      （1）按照常规方法进行电泳。

      （2）用H2O将GelGreen 10,000×储液稀释约3,300倍到0.1 M NaCl中，制成3×染色液。（例如将15μL GelGreen 10,000×储液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中）。

      （3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中，缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶，室温振荡染色30 min左右，*染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30 min到1 h，并随丙烯酰胺含量增加而长。

注意事项：

1）用泡染法染色时，染料用量较多，单次使用的染色液可重复使用3次左右。3×GelGreen染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。

2）如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。

3）如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度、延长凝胶时间以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。

3．预染法（zui省染料的染色方法，按25μL体积上样，500μL原液理论做20万个样品）

       1）该方法适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳

       2）工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的GelGreen 原液稀释1000倍，即为10 X GelGreen工作液。GelGreen工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。

       3）制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。

       4）样品染色：向分析样品中加入GelGreen工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使GelGreen与样品中DNA充分结合。GelGreen工作液加入量为总上样量的1/10，使GelGreen在上样时的终浓度为1X.

       5）DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和1μL GelGreen工作液混匀，室温放置5分钟，使GelGreen与DNA充分结合。

       6）上样、电泳：按常规操作。

注意事项：

根据染料分子量小，带电荷少的特性开发本染色方法，按照一块胶10个样品计算，500μL原液理论上可以完成2万块胶的染色。

疑难解答

1. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中，GelGreen 可以全部从双链核酸上去掉。

2. 如果想对用 GelGreen 染过的胶进行 Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。

3. 在紫外照射观察下，与双链 DNA 接合的 GelGreen 呈现红色荧光。

4. GelGreen对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

5. GelGreen原液在室温保存，如放置冰箱保存会产生部分沉淀，使用前适当加热并摇匀即可正常使用。

几种核酸染料比较