T2毒素检测试剂盒

使用说明书

（酶联免疫法）

 1 原理及用途

T2毒素检测试剂盒采用一步竞争ELISA方法检测玉米、大米、豆类、花生、燕麦、饲料等样本中的T2毒素，试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，酶标板微孔条上预包被T2毒素抗原与样本中T2毒素竞争抗T2毒素抗体(抗体工作液)，同时抗T2毒素抗体与酶标二抗（酶标记物）相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的T2毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中T2毒素的含量。

2 技术指标

2.1 T2毒素检测试剂盒灵敏度：0.05ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃，30min～15min

2.3 检测下限：

花生、玉米、燕麦、大豆、饲料等 6ppb

3 T2毒素检测试剂盒组成

酶标板 96孔

浓缩标准液6瓶

酶标记物 1瓶

抗体工作液1瓶

底物液A 1瓶

底物液B 1瓶

终止液1瓶

浓缩洗涤液1瓶

说明书 1份

盖板膜 1份

自封袋 1份

4 需要的器材和试剂

4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）、漏斗、滤纸

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 试剂：甲醇、去离子水

5 酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

5.1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5.2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。

5.3 洗    涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

5.4 显    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。

5.5 终    止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。

5.6 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

6 结果分析

6.1 百分吸光率的计算

    标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以*个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以*，即

A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值

6.2 标准曲线的绘制与计算

    以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。

    若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（索取）

7 贮藏及保存期

储藏条件：T2毒素检测试剂盒于2-8℃保存，避免冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。